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中耳胆脂瘤主要的病理特征表现为中耳腔内鳞状上皮的高度增生和邻近骨质的破坏，以及程序性角质细胞凋亡。它具有侵袭性、破坏性、迁移性、分化变异性、复发性等类似于恶性肿瘤的生物学特征，但已证明中耳胆脂瘤不是一种恶性肿瘤，而属于良性病变。通过细胞增殖标记物CK16、核抗原Ki67、PCNA的研究，证明中耳胆脂瘤上皮具有异常增殖的特性。癌基因Bcl-xL和抑癌基因p53在中耳胆脂瘤上皮的异常表达，说明胆脂瘤上皮异常增殖的同时伴有细胞的凋亡。这正是中耳胆脂瘤具有肿瘤样行为却又不是肿瘤的特殊性。有关胆脂瘤上皮细胞增殖、凋亡和骨破坏机制尚不十分清楚。本实验采用Western-blot印迹杂交、RT-PCR和免疫组化方法检测了32例中耳胆脂瘤患者胆脂瘤组织和12例正常外耳道皮肤中Calpain的表达，旨在探讨组织酶-Calpain在胆脂瘤上皮细胞凋亡中的作用。结果显示Calpain在胆脂瘤组织中有蛋白的高表达，阳性细胞分布基底细胞层以上的各层细胞中，棘细胞层、颗粒层和角质层依次递增，染色最强的部位是角质层和颗粒层，而基底细胞层没有表达；正常外耳道皮肤无Calpain的蛋白表达。同时CalpainⅠmRNA在正常外耳道皮肤和胆脂瘤组织中均有表达，但胆脂瘤中<WP=99>的表达略高于正常外耳道皮肤，两者间无统计学差异(P>.05)；正常外耳道皮肤不表达或表达很低水平的CalpainⅡ，而在胆脂瘤组织中CalpainⅡ的表达却明显高于正常外耳道皮肤（P<0.0001）。结果表明Calpain通过水解蛋白质的活性参与细胞的凋亡，与中耳胆脂瘤上皮细胞凋亡有相关性，它的两个亚型-CalpainⅠ和CalpainⅡ在中耳胆脂瘤的细胞凋亡机制中发挥着重要作用，但CalpainⅡ的作用占主导地位。癌基因是细胞内生长的基因，在异常表达时其产物可使细胞持续增殖。C-myc、C-jun、RAS蛋白、p53通过各自的调控机制参与了胆脂瘤上皮的增殖与分化。有关原癌基因MDM2和抑癌基因PTEN与中耳胆脂瘤上皮过度增殖行为相关性的研究，国内外未见报道。本研究应用RT-PCR技术和免疫组化技术，又检测了MDM2和PTEN在中耳胆脂瘤中的表达。结果发现MDM2分布于胆脂瘤上皮全层，在基底层细胞表达最弱，棘细胞层、颗粒层和角质层依次递增，染色最强的部位是颗粒层和角质层，正常外耳道皮肤未见表达。而PTEN在胆脂瘤上皮和正常外耳道皮肤均表达相似水平的mRNA和蛋白。因此，我们推测p53/MDM2反馈环异常可能是胆脂瘤上皮异常增殖和凋亡的原因之一，在胆脂瘤基底层细胞表达少量的MDM2可能是维持胆脂瘤不同于恶性肿瘤组织的无限增殖和浸润的基础。而PTEN的作用更趋向于维持上皮细胞的正常生理状态，而不是发生基因异常导致细胞非正常增殖。骨质破坏是后天性中耳胆脂瘤的重要临床特征，为了研究TIMPs和细胞因子与中耳胆脂瘤骨破坏行为的相关性，我们又检测了TIMP-1、TIMP-2和IL-6在中耳胆脂瘤中的蛋白表达，结果显示TIMP-1和TIMP-2的阳性细胞位于细胞浆；TIMP-1在胆脂瘤上皮的棘细胞层有少量表达，TIMP-2在基底细胞层和棘细胞层有少量表达；而正常外耳道皮肤未见TIMP-1、 TIMP-2表达。定量分析显示TIMP-1的表达水平略低于外耳道皮肤，而TIMP-2则略高，但两者与正常对照组比较，均无统计学差异(P>0.05)。IL-6分布于胆<WP=100>脂瘤上皮全层，但在基底层细胞表达最弱，棘细胞层、颗粒层和角质层依次递增，染色最强的部位是颗粒层和角质层，正常外耳道皮肤各层细胞未见IL-6表达。结果表明在胆脂瘤组织中出现TIMP-1、TIMP-2的低表达，它们的低表达减弱了对MMP-1、MMP-2的抑制作用，导致MMP-1、MMP-2的表达增强，结果提示在胆脂瘤中存在MMPs与TIMPs的表达失衡，导致胆脂瘤的骨质破坏。而且在胆脂瘤中TIMP-1的表达比TIMP-2偏低，更低于正常外耳道皮肤，表明TIMP-1对MMP-1蛋白水解酶活性的抑制作用的减弱程度比TIMP-2更为严重，提示在胆脂瘤骨破坏机制中TIMP-1的意义远较TIMP-2大。同时证明IL-6既可能通过刺激破骨细胞前体细胞的形成和分化，导致骨质破坏；又可能通过诱导胆脂瘤上皮细胞分泌多种MMPs来介导骨质降解过程。本实验证实组织酶Calpain、MMPs及TIMPs和癌基因MDM2、PTEN存在于胆脂瘤组织中，参与了中耳胆脂瘤上皮细胞的生长调节，正是这种细胞内部错综复杂的调节网络，导致了中耳胆脂瘤的发生、发展。