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不结球白菜(Brassica campetris ssp.Chinensis Makino)原产于中国,在蔬菜的周年供应中占有重要地位。由于不结球白菜喜冷凉,因此高温胁迫对其夏季的产量和品质影响很大。有关不结球白菜耐热性研究及其常规育种已有进展,但仍不能满足生产及消费需要。利用植物基因工程技术进行遗传改良,以增强不结球白菜的抗逆境能力,是不结球白菜遗传改良的重要目标。但由于不结球白菜的再生能力因基因型的不同而存在着较大的差异,需对每个特定的对象建立一套高效再生系统。
本文以薹菜子叶-子叶柄、子叶柄和下胚轴为试材,进行离体培养再生体系研究。结果表明,最适于薹菜不定芽分化的条件是:5d苗龄的子叶-子叶柄为最佳外植体材料,最佳培养基为MN+BAP5 mg·L-1+ZT2 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1+AgNO37.5 mg·L-1,子叶-子叶柄再生频率达67.8%。
对影响农杆菌介导遗传转化效率的因素进行了研究:Km的适宜浓度为10 mg·L-1;外植体预培养2天有利于转化率的提高;农杆菌菌液浓度对转化效率也有影响,随着菌液浓度的增大,转化效率有提高的趋势,在OD600=0.5时,转化效率最高;侵染时间以5min最佳;共培养时间为2天时获得了最高的转化效率。成功将LFY基因导入不结球白菜,获得3株GUS阳性苗。
用5-氮胞苷(5-azaC)溶液处理不结球白菜种子,研究了高温胁迫下5-azaC处理对不结球白菜幼苗与耐热性有关的部分生理指标的影响。结果表明:在36℃/28℃高温下,不结球白菜幼苗的生长量、过氧化物酶(POD)活性、蛋白质含量降低;超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和细胞膜透性升高。5-azaC处理可减缓不结球白菜幼苗生长量、POD活性和蛋白质含量的降低幅度;减缓MDA含量和细胞膜透性的升高幅度;提高SOD活性升高幅度。表明5-azaC处理能够提高不结球白菜幼苗对高温胁迫的适应能力。