【摘 要】
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目的:以实验方式研究B-细胞淋巴瘤因子(B-cell lymphoma factor,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)以及血管内皮生长因子(vascular en-dothelialgrowth factor,VEGF)在早期糖尿病大
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目的:以实验方式研究B-细胞淋巴瘤因子(B-cell lymphoma factor,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)以及血管内皮生长因子(vascular en-dothelialgrowth factor,VEGF)在早期糖尿病大鼠视网膜上的表达及意义。致病因子在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)早期起到哪些重要的作用,这是我们研究的方向。方法:以大鼠的眼球作为研究对像,首先向其体内腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)进行定向培养。按照需要研究的方向,在不同的生理阶段对大鼠进行处理,制作成我们需要的相应的标本,便于以下做实验使用。在标本上进行不同程度的标记,具体的观察相应的酶原物质在细胞内的形态变化,并做好记录。选定研究的动物:雄性Wistar大鼠40只,并将这些大鼠进行分组研究。一组是DR组也就是我们需要研究的糖尿病组,另一组是BC组,也就是对照组,用于与研究组做对比用的,每组分为20只进行饲养。将喂养的时间定为12周,然后根据模型需要进行定向培养,造成我们想要的模型。在喂养期间不控制他们的饮食,对大鼠的各生命体征进行检测,定时观察,着重记录血糖的波动及体重变化。在相应的周期阶段经进行处理,取出眼球做成切片和铺片。用染色物质对标本染色标记以方便观察,并对其进行化学检测,用光学显微镜观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目。采用TUNEL法检测胰岛细胞凋亡情况。切片的制作严格按照说明书上的内容要求进行。与其相反的阴性对照结果不添加末端转移酶(TdT),其他的程序都不进行区别。从每个小组当中在不进行定向选择的情况下拿出5张切片,在每张切片上任意选取5个胰岛,并用专业的图像分析软件对胰岛细胞和已经死亡的细胞进行计数,算出死亡率。通过S 2 P法检测半胱天冬蛋白酶的表达。操作过程和测定方法同胰岛素免疫组化染色,以IA/Area×100作为指标,对大鼠体内胰岛半胱天冬蛋白酶的情况进行测试。切片按照要求制作完成后,利用在显微镜放大的情况下,任意的选出界限比较明朗的几个视野,并且利用NIH Image软件包计算整个视网膜面积和视网膜没有血管部分的区域面积,对细胞内钙离子的浓度进行测量。下边是采用医学相关统计软件包统计出来的结果。结果:每个小组中大鼠视网膜上边的Bcl-2、bax以及血管内皮生长因子在细胞内的情况是:他们的蛋白免疫反应产生的物质都在细胞浆中存在,颜色是棕黄色,形态是颗粒状。通过数据可以看出实验组中这些因子之间的比值都有很大程度上的升高,与正常组有极大地不同。Bcl-2、Bax、VEGF在视网膜各层的表达:Bcl-2除视杆视锥细胞外节之外各层均有表达,且在视杆视锥层内节表达最强,表达次强为节细胞层和神经纤维层;后两者在节细胞层和神经纤维层表达最强,VEGF表达次强为Muller细胞。结论:在大鼠患有糖尿病的初期,视网膜内的神经节细胞不断地失去细胞活性,进而死亡,而且其细胞内钙离子浓度呈持续上升的趋势。通过列组进行观察:血糖浓度的升高除了直接作用在视网膜血管上,还能通过间接的影响神经节细胞的活性,进而对视网膜病变中新生血管的形成造成一定的影响。视网膜内大量神经节细胞死亡失去活性的情况,严重影响了其基因的表达。因此,我们得出的结论是血糖浓度的升高在其中起着重要的作用,早期糖尿病大鼠视网膜的Bcl-2,Bax可能由高浓度血糖诱导,从而进一步上调VEGF的表达。
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