iTRAQ定量蛋白质组学对乙肝肝硬化失代偿血清差异蛋白的鉴定及分析

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背景:乙肝相关性肝硬化失代偿(HBV-DLC)是一个全球性的卫生问题,现在预测HBV-DLC患者预后的主要方法是Child评分和MELD评分。然而,这两种评分标准都有明显的局限性。为了寻找更加准确、可靠的HBV-DLC预后标志物,我们开展了本研究。方法:采用基于同位素标记相对定量和绝对定量技术(iTRAQ)的蛋白质组学研究方法,分析正常、慢性乙型肝炎(CHB)、乙肝肝硬化代偿期(HBV-CLC)、乙肝肝硬化失代偿期(HBV-DLC)四组样本的血清蛋白表达谱,找出在HBV-DLC患者中异常表达的蛋白。采用ELISA、Western blot技术对质谱结果进行验证,并从中筛选更有价值的候选蛋白,对其进行后续的临床分析。结果:共有437个蛋白被鉴定出来。以Non-HBV-DLC组为对照,有21个蛋白在HBV-DLC患者中是异常表达的,其中包括18个下调蛋白,3个上调蛋白。通过生物信息学分析和文献检索,发现转铁蛋白和SERPINA1蛋白跟HBV-DLC患者预后的关系可能更密切。选取新的血清标本,用ELISA技术对这两个候选蛋白进行验证,发现转铁蛋白和SERPINA1蛋白在血清中的含量均是随着疾病的进展逐渐下降的,这和质谱检测的结果相一致。ROC分析发现转铁蛋白对HBV-DLC患者的诊断较能要高于SERPINA1 (AUC:0.86 vs 0.76, p<0.01),提示转铁蛋白可能跟HBV-DLC患者预后的关系更大。因此,选择转铁蛋白用于后续的研究与验证。Western blot和免疫组化也发现了血清转铁蛋白的水平随着疾病的进展逐渐下降。对新的]HBV-DLC队列进行研究发现,血清转铁蛋白在HBV-DLC死亡组的水平要显著低于HBV-DLC存活组(p< 0.01)。ROC分析提示转铁蛋白对HBV-DLC死亡患者的预测较能和MELD评分相似(AUC:0.80 vs 0.72, p=0.13)。结论:HBV-DLC患者的死亡或和血清转铁蛋白的下降有关。本研究提示基于iTRAQ标记的定量蛋白质组学技术在HBV-DLC预后标志物的研究中有较好的效果。
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