恶性疟原虫转染技术平台的建立

来源 :北京协和医学院中国医学科学院 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yryr0804
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在疟原虫的基因操作中,转染技术通过同源重组或基因直接编辑的方式实现目的基因的的敲除或替换,是通过研究疟原虫的基因功能,从而了解其生物学特征的有力技术手段。  本研究的目的是通过构建疟原虫的转染技术平台研究Pfmag-1的功能。先后尝试了两种疟原虫转染体系:Gene insert/Marker out(GIMO)和基因敲除。GIMO系统可用来表达恶性疟原虫的蛋白,我们试图通过GIMO系统表达恶性疟原虫的Pfmag-1基因,以阐明PfMAG-1蛋白的功能及其与宿主的相互作用。实验中首先摸索了伯氏疟原虫体外培养的最佳条件,优化后的裂殖体活力高,单位时间内的成熟率达到80%左右,为疟原虫的高效转染提供了关键的技术保障。在随后对GIMO系统母系虫株进行的鉴定中发现该虫株的筛选基因出现表达缺陷,已不能用于表达恶性疟原虫蛋白。继而通过同源臂的双交换重组进行恶性疟原虫的基因敲除,经阴阳双选择药物筛选系统实现目标。本实验对恶性疟原虫Pfmag-1基因进行敲除的同时以Pfmif基因敲除作为对照,最终获得了Pfmif基因缺失虫株,证明基因敲除平台构建成功。实验中未获得Pfmag-1缺失虫株,提示Pfmag-1基因可能是疟原虫生长的必需基因,敲除该基因可导致疟原虫的死亡。结合本实验室前期的实验结果,推测Pfmag-1是恶性疟原虫红细胞内期生长周期中重要的基因,需进一步验证它的功能。
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