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近年来,非酒精性脂肪肝疾病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)已显示出年轻化和患病率增加的趋势,其病因复杂多样,已知主要与胰岛素抵抗,炎症和脂肪细胞因子等因素相关,目前缺乏理想的治疗药物和方案,长期的药物治疗容易产生毒副作用。从功能性食品中筛选具有生物活性的物质对NAFLD的防治具有极其重要的意义。丹参作为我国最常用的传统中药之一,具有活血化瘀,保肝利胆的功效,目前已经被列入保健食品原料和功能目录中,相关开发方兴未艾。丹参酮ⅡA(Tanshinone IIA,TAN-ⅡA)是丹参中的主要成分之一,常用于治疗心血管疾病,但对肝脏疾病的研究却还很少。因此,本研究通过体内动物实验和体外细胞实验探究TAN-ⅡA对NAFLD的改善作用以及其中可能的分子机制。主要研究内容如下:(1)动物模型中探究TAN-IIA对小鼠NAFLD的治疗作用。6周龄SPF级别雄性C57BL/6小鼠随机分为两组:正常对照组;高脂饮食组。喂养14周后,通过测定体重,空腹血糖,葡萄糖耐受和胰岛素耐受等指标确定模型是否成功,剔除异常个体后重新分组开始治疗,总共分为4组:正常对照组;高脂饮食组;TAN-IIA治疗组(50 mg/kg);二甲双胍治疗组(200 mg/kg),其中以二甲双胍作为阳性对照,每天通过灌胃的方式给药5周,最后一周进行小鼠口服葡萄糖耐受实验(Oral glucose tolerance test,OGTT)和胰岛素耐受实验(Insulin tolerance tests,ITT),并使用全面监测系统测定代谢率等指标,实验结束后收集小鼠血浆,肝脏,附睾白色脂肪等组织,使用全自动生化分析仪和试剂盒测定血浆中血脂相关指标,苏木精-伊红染色法评估肝脏组织病理形态学改变,蛋白免疫印迹法检测肝脏组织脂肪代谢相关蛋白表达水平变化。(2)细胞模型中摸索TAN-IIA可能的分子机制和作用靶标。测定TAN-IIA对Hep G2细胞毒性,确定合适的给药浓度,通过药理学抑制和基因沉默方法探究其中可能的分子机制,蛋白免疫印迹法检测脂肪代谢相关蛋白表达水平变化,荧光探针法测定细胞内钙离子浓度,试剂盒测定细胞内环磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate,cAMP)水平,蛋白质体外结合实验验证分子靶标。结果显示:(1)在动物实验中,TAN-IIA治疗可以降低肥胖小鼠的体重,改善空腹血糖,葡萄糖耐受和胰岛素耐受等糖代谢异常;肝脏,附睾白色脂肪重量明显降低;血浆血脂指标明显改善;肝脏组织病理切片表明肝细胞脂质沉积和脂肪变性明显减少;小鼠呼吸商,产热和自发运动量明显增加,这些结果都表明了TAN-IIA对NAFLD具有明显的改善作用。(2)在细胞实验中,TAN-IIA可以激活人肝癌细胞HepG2中腺苷酸活化的蛋白激酶-乙酰辅酶A羧化酶(AMP-activated protein kinase-Acetyl CoA carboxylase,AMPKACC)信号通路,并具有剂量和时间依赖;通过钙离子荧光探针发现TAN-IIA可以增加细胞内钙离子水平,且是钙调蛋白依赖的;通过药理学抑制和基因水平沉默β2-肾上腺素能受体(β2-adrenergic receptor,β2-AR),发现HepG2细胞对TAN-IIA敏感性降低,这表明TAN-IIA可能通过β2-AR,激活下游信号通路,促进肝细胞脂肪氧化,从而减少肝脏脂肪积累。我们的研究发现了TAN-IIA是一种具有保肝功效的功能因子,并揭示了其中可能的分子机制,为今后功能性食品的研发提供了新的思路。