【摘 要】
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目的研究脂肪间充质干细胞(adipose tissue-derived stem cells,ADSCs)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的硬皮病小鼠的治疗效果及其可能的作用机制。方法选取C57BL/6雌性小鼠2
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目的研究脂肪间充质干细胞(adipose tissue-derived stem cells,ADSCs)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的硬皮病小鼠的治疗效果及其可能的作用机制。方法选取C57BL/6雌性小鼠24只,采用皮下注射BLM(2 mg/(kg·d))建立硬皮病小鼠模型,随机分为正常对照组、BLM组、ADSCs(皮下)组和ADSCs(静脉)组,每组6只,正常对照组给予生理盐水2 m L/(kg.d)皮下注射,其余3组分别给予BLM皮下注射,连续3周;造模成功后,正常对照组和BLM组给予生理盐水2 m L/(kg.d)皮下注射,ADSCs皮下和尾静脉注射组分别给予皮下和尾静脉注射ADSCs(2×10~5个细胞)治疗,每4天1次,共3次。流式细胞术检测小鼠脾细胞中的辅助T细胞17(T-helper 17,TH17)及调节性T细胞(regulatory T cell,Treg),实时荧光定量聚合酶联反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测小鼠肺组织中相关细胞因子的表达水平,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测小鼠血清中白介素(interleukin,IL)-6、转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)的含量,苏木精-伊红染色(hematoxylin eosin staining,HE)观察小鼠的皮肤和肺组织病理学改变。结果流式细胞术结果显示,BLM组较正常对照组小鼠脾细胞中TH17和Treg所占比例升高(P<0.05),经ADSCs治疗后,TH17所占比例降低(P<0.05),而Treg所占比例升高(P<0.05)。与正常对照组相比,BLM组小鼠肺组织中IL-17、IL-6、肿瘤坏死因子ɑ(tumor necrosis factor-α,TNF-ɑ)的m RNA表达水平及血清中IL-6的含量均升高(P<0.05),ADSCs治疗后,其表达量下降(P<0.05),ADSCs(皮下)组和ADSCs(静脉)组比较差异无统计学意义。BLM组小鼠血清中TGF-β的含量较对正常对照组升高(P<0.05),但小鼠肺组织中TGF-βm RNA的表达水平与正常对照组之间差异无统计学意义,经ADSCs治疗后TGF-β基因和蛋白的表达无明显变化。HE染色结果显示,BLM组与正常对照组相比,肺组织有大量炎性细胞浸润,肺泡间隔断裂或消失;皮肤真皮层增厚,有大量的胶原纤维积聚,经ADSCs治疗后小鼠肺组织炎症有所改善,皮肤的真皮层变薄,胶原纤维积聚减少。结论ADSCs可以有效缓解硬皮病小鼠肺的炎症和皮肤的纤维化症状,其抗炎和抗纤维化作用与其免疫调节功能有关。
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