论文部分内容阅读
目的:通过观察肢体缺血后处理中氯化锂对糖原合酶激酶3β(GSK3β)及其下游微管相关蛋白2(MAP2a/b)的影响。探讨肢体缺血后处理是否通过GSK3β/MAP2a/b信号通路对脑缺血再灌注起保护作用。方法:制作脑缺血再灌注,肢体缺血后处理及氯化锂干预大鼠模型,选用60只SPF级雄性SD大鼠(220-280g)按随机数字表法分为4组,假手术组(sham)、缺血再灌注组(I/R组)、肢体缺血后处理组(Lpost C组)、肢体缺血后处理+氯化锂(GSK3β阻断剂)组(Li Cl组)。I/R组:缺血2h之后再灌注24h。Lpost C组:缺血2h之后再灌注24h,再灌注的同时进行肢体缺血后处理,双侧股动脉缺血5min,灌注5min,3个循环。Li Cl组:再灌注前20min进行腹腔注射Li Cl 3mmol/kg,其他处置方法与Lpost C组基本相同。于大鼠脑缺血再灌注24小时及加药后进行神经功能缺损评分,HE病理形态学染色,测定大鼠脑梗死体积;TUNEL法检测细胞凋亡率;Western blotting法检测P-GSK3β(ser9),MAP2a/b的蛋白表达。免疫组织化学法测P-GSK3β(ser9),MAP2a/b免疫阳性细胞率。分析肢体缺血后处理是否通过GSK3β/MAP2a/b对脑缺血起保护作用。结果:1.神经行为学评分:假手术组大鼠无明显神经功能缺损,脑缺血再灌注模型组神经功能缺损评分最高,肢体缺血后处理组较低,氯化锂组神经功能缺损评分最低,四组相比统计学有显著差异(P<0.05),2.缺血侧顶叶皮层(尾状核平面)的病理改变:假手术组大鼠脑组织结构正常。缺血再灌注组可见有大片坏死区,坏死区内无神经细胞及神经胶质细胞。肢体缺血后处理组神经细胞变性坏死程度较缺血再灌注组轻,而氯化锂组较前两者则坏死程度更轻3.大鼠脑梗死病灶体积:大鼠脑组织在假手术组中无梗死病灶。在缺血再灌注组中最大,在肢体缺血后处理中较缺血再灌注组减少,两者相比有统计学差异(P<0.05),梗死面积在氯化锂组中最小,与缺血再灌注组和肢体缺血后处理组相比有统计学差异(P<0.05)。4.TUNEL实验中阳性凋亡细胞率:假手术组有少量的凋亡细胞。I/R组凋亡细胞明显增多,肢体缺血后处理组凋亡细胞减少,三组相比有统计学意义(P<0.05)。氯化锂组与I/R组,肢体缺血后处理组相比凋亡细胞数减少,三组相比有统计学意义。5.Western blotting实验中缺血侧顶叶脑组织中P-GSK3β(ser9),MAP2a/b蛋白的表达:假手术组可见有P-GSK3β(ser9)蛋白的表达,I/R组脑组织P-GSK3β(ser9)蛋白的表达明显减少,肢体缺血后处理组P-GSK3β(ser9)蛋白的表达增多,氯化锂组P-GSK3β(ser9)蛋白的表达最多,四组相比差异有统计学意义(P<0.05)。假手术组有MAP2a/b表达最多,I/R组MAP2a/b表达减少,肢体缺血后处理组表达增多,氯化锂组较肢体缺血后处理组表达增多,四组相比有统计学差异(P<0.05)。6.免疫组化中P-GSK3β(ser9),MAP2a/b免疫阳性细胞数的表达:缺血再灌注组仅有少量P-GSK3β(ser9)免疫阳性细胞表达,与假手术组相比,有统计学差异(P<0.05)。与I/R组比较,Lpost C组、Li Cl组P-GSK3β(ser9)免疫阳性细胞数逐渐增加,三组相比差异有统计学意义(P<0.05)。假手术组有MAP2a/b大量表达,为正常的神经细胞表达。缺血再灌注组仅有少量MAP2a/b免疫表达,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与I/R组相比,Lpost C组免疫阳性细胞率增加,Li Cl组MAP2a/b免疫阳性细胞率最多,三组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.肢体缺血后处理组能改善神经功能缺损症状,减少脑神经病理组织损伤,减少脑梗死病灶体积,减少凋亡细胞,增加P-GSK3β(ser9)蛋白的表达,MAP2表达逐渐增多,逐渐增加P-GSK3β(ser9),MAP2a/b免疫阳性细胞。肢体缺血后处理对脑缺血再灌注损伤有保护作用。2.大鼠脑缺血再灌注减少P-GSK3β(ser9),MAP2a/b阳性细胞表达,肢体缺血后处理组增加P-GSK3β(ser9),MAP2a/b阳性细胞表达,P-GSK-3β(ser9)是GSK-3β的失活形式。肢体缺血后处理抑制GSK3β/MAP2a/b信号通路对脑缺血再灌注起保护作用。