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目的 多药耐药(multidrug resistance，MDR)是指细胞对一种化疗药物出现耐药的同时，对其他结构不同、作用靶位不同的化疗药物亦产生抗药性。目前急性白血病(acute leukemia，AL)的治疗以化疗为主，而MDR是造成化疗失败最主要的原因。引起MDR的机制复杂多样，除P-170糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)过度表达所致的耐药外，DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、谷胱甘肽转移酶(GST)、bcl-2和DNA修复机制等亦参与白血病细胞的多药耐药。 TopoⅡ是调整DNA拓扑学的重要核酶，在DNA复制、转录和重组过程中发挥重要作用。TopoⅡ有两种同工酶，TopoⅡα和TopoⅡβ。蒽环类、鬼臼毒素类和吖啶类等细胞毒药物通过与TopoⅡα和DNA形成稳定的易解离复合物，阻止DNA断链的重新连接，使DNA双链断裂而发挥抗肿瘤作用。TopoⅡα表达水平下降是肿瘤细胞产生耐药性的重要原因。DNA双链断裂后，会启动DNA修复机制。DNA依赖蛋白激酶(DNA-PK)是含有丝／苏氨酸激酶的一种细胞核酶，参与DNA损伤的识别与修复，是DNA损伤后修复的关键酶。DNA-PK由催化亚单位(DNA-PKcs)和自身免疫性抗原Ku构成。Ku与DNA双链末端和其他断裂的DNA结合，然后募集催化亚单位。通过对细胞系的研究发现，DNA-PK表达的升高或降低与细胞系的药物反应有关。DNA-PKcs表达增高，DNA修复能力增强也是肿瘤细胞产生耐药性的原因。 TopoⅡα和DNA-PKcs参与耐药的机制与DNA的损伤和DNA损伤后的修复有关，推测两者在介导耐药过程中可能存在内在的联系。目前未见有关TopoⅡα和DNA-PKcs共同表达与MDR关系的报道。为研究TopoⅡα和DNA-PKcs在AL患者中的表达及其与MDR的关系，以及TopoⅡα和DNA-PKcs之间的关系，我们用免疫组化方法同时检测了62名AL患者骨髓白血病细胞TopoⅡα和DNA-PKcs的表达。结果表明，AL患者TopoⅡα表达水平下降，DNA-PKcs表达水平升高与临床耐药密切相关。材料和方法 1.临床资料 符合FAB分型诊断标准的62例AL患者，男44例，女18例，中位年龄 39岁。其中急性髓系白血病(AML)患者45例(Mol例，M，5例，M27例， M36例，M45例，M。16例，M63例，M72例)，急性淋巴细胞白血病(ALL)患 者17例(L12例，姚14例，几1例)。以10名非恶性血液病患者的骨髓作为 对照组(ITP4例，缺铁性贫血3例，巨幼细胞贫血3例)，其中男6例，女4 例，中位年龄34岁。 2.临床耐药标准 按照参考文献【3〕的标准将62名AL患者分为化疗耐药组和化疗敏感 组，分别为33名和29名。 3.化疗方案和疗效判断 根据白血病分型以及是初治还是难治复发病例制定化疗方案。疗效判 断参照张之南主编的《血液病诊断及疗效标准》。 4实验方法 标本采集和单个核细胞(MNC)的分离所有患者取1一毫升肝素抗凝 骨髓，用Ficon分离液(相对密度1 .077)分离单个核细胞(乃00扩而n， 20 min)，离心涂片，选择白血病细胞占90%以上的标本，20℃保存备用。 Top。na、DNA一PKcs的检测本实验采用免疫组化SP法检测白血病细 胞Topo na、DNA一PKes的表达。免疫组化染色严格按照操作规范进行。以 PBS代替一抗作为阴性对照，乳腺癌细胞系MCF-7作为肠脚n。的阳性对 照，白血病细胞系U937作为DNA一PKcs的阳性对照。阳性细胞)巧%为阳 性表达。 5统计学处理 采用xZ检验、Fisher精确分析和Spe一等级相关分析处理相关数 据。结果1.62例AL患者中Topo na、DNA~PK治s的表达率分别是50%和37.1%，对照组中Topo na、DNA一PKcs的表达率分别是10%和30%。AL患者Topo na表达率明显高于对照组(P<0 .05)，DNA-PKcs的表达率与对照组相比无明显差别(P>0.05)。 2.耐药组ToPo na表达率(33 .3%)明显低于敏感组(69%)(P<0 .01)，耐药组DNA一PKcs表达率(51 .5%)明显高于敏感组(20.7%)(P<0 .05)。 3.根据患者ToPo lla、DNA一PKcs的表达情况，将患者分为4组。一组是Topo lla和DNA一PKcs均阳性表达，二组是肠即na阳性表达DNA.PKCS阴性表达，三组是Topo na阴性表达DNA.PKcs阳性表达，四组是乳卯n。和DNA一PKcs均阴性表达。在Topo na均阳性表达的两组中，同时伴有DNA一PKcs阳性表达组的耐药率(61 .5%)明显高于DNA-PK沦s阴性表达组(16.7%)(P<0.05);在Topo na均阴性表达的两组中，同时伴有DNA-PKcs阳性表达组的耐药率(90%)亦高于DNA一PKcs阴性表达组(61 .9%)，但差异不显著(P>0.05)。在DNA一PKcs均阴性表达的两组中，同时伴有Topon。阳性表达组的耐药率(16 .7%)明显低于Topon。阴性表达组(61·9%)(P<0.01);在DNA一PKcs均阳性表达的两组中，同时伴有乳即na阳性表达组的耐药率(61 .5%)亦低于Topon。阴性表达组(90%)，但差异不显著(P>0.05)。以Topo lla阳性表达 DNA一PKcs阴性表达组耐药率最低(16.7%)，Topo na阴性表达DNA一PKcs阳性表达组耐药率最高(90%)，两者差异显著(P<0.001)。Topo na和DNA一PKcs的表达水平无相关性(r。=0.13，P=0.3)。结论 AL患者To