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角质细胞生长因子-2(Keratinocyte growth factor-2,KGF-2)又称成纤维细胞生长因子-10(Fibroblast Growth Factor-10,FGF-10),是成纤维细胞生长因子家族中的新成员,能特异性促进上皮细胞增殖、分化和移行。重组人KGF-2(rhKGF-2)是以大肠杆菌为载体,优化密码子后合成1类基因工程新药。本课题研究rhKGF-2对大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的影响,同时探讨细胞调控机制。
建立大鼠深Ⅱ度烫伤模型,每天局部给药1次,连续15d,每4d测量伤口面积并计算愈合率,第16天观察新生表皮厚度、移行距离及面积。rhKGF-2 5、15、45μg/伤口均能不同程度提高伤口愈合率及增加新生表皮的厚度、移行距离和移行面积(P<0.01)。皮肤标本角蛋白免疫组化实验显示rhKGF-2治疗后新生表皮的角质层厚度增加,从形态上更直观证明rhKGF-2能显著促进新生表皮的生长。
通过体外培养永生化人角质细胞HaCaT研究rhKGF-2对细胞增殖的影响。rhKGF-2(1~100ng/ml)均显著促进HaCaT细胞增殖,且呈浓度依赖性,HaCaT细胞增殖率与rhKGF-2的浓度对数呈线性关系(R2=0.965,P<0.05)。rhKGF-2(1~100ng/ml)刺激下HaCaT细胞集落形成率也增加(P<0.05),形成的集落较大,集落内细胞呈明显的增殖形态,细胞多呈星状,胞内染色质丰富。而低浓度rhKGF-2(1ng/ml、10ng/ml)对成纤维细胞NIH3T3细胞无明显影响。提示rhKGF-2是表皮细胞特异性分裂原,一定剂量的rhKGF-2不易产生病理性疤痕。
此外,rhKGF-2(100ng/ml)刺激后进入S期的HaCaT细胞比例显著增加,G0G1期比例降低(P<0.01)。rhKGF-2能激活ERK磷酸化,显著促进活化的ERK进入细胞核。提示rhKGF-2可能激活ERK信号通路,调控细胞周期,从而促进HaCaT细胞增殖。
通过建立HaCaT细胞刮伤模型进一步观察rhKGF-2对细胞移行的影响。结果显示,rhKGF-2 (1~100ng/ml)加速划痕周围细胞向中央细胞缺失区域移行,且呈浓度依赖性,rhKGF-2(100ng/ml)作用效果最显著,该浓度药物刺激36h后多数划痕已经完全闭合。
上述研究表明rhKGF-2可能通过促进表皮细胞增殖、移行和激活ERK信号传导通路,从而加快烫伤创面愈合,研究结果为临床应用rhKGF-2治疗烫伤提供理论和实验依据。