软件辅助柑橘染色体的核型与带型分析

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柑橘是世界重要的果树之一。其资源丰富,品种繁多。染色体的核型与带型分析是一种能有效鉴定柑橘品种的分子细胞遗传学方法。本实验旨在研究不同属间柑橘染色体的遗传差异,从中寻找到具有属间特有的标记性染色体,为柑橘杂种鉴定奠定基础;为柑橘属植物的系统分类、进化趋势、保护和杂交育种研究积累必要的细胞学资料。通常,前人根据肉眼可见的CMA~+条带数目与其在染色体上分布位置将柑橘的染色体分为5-7种有限类型,而本研究在前人的基础上,采用MicroMeasure与Image-Pro plus生物学图像软件对四季橘(Citrus mandurensis Lour)、金柑(Fortunella crassifolia Swingle)、枳壳(Poncitrus trifoliata(L.)Raf)、红橘(C.reticulata)和HB柚(C.grandis)进行精确的染色体核型与带型结构分析。测定每条染色体上DAPI荧光强度的变化(从短臂到长臂),得到荧光波动图,量化荧光强度的变化,因而检测到每条染色体的特异性。主要研究结果如下:1.对四季橘、金柑、枳壳、红橘、HB柚根尖分生区细胞中的染色体进行染色计数观察。选取分散良好的体细胞分裂相50个,统计染色体数目。表明四季橘、金柑、枳壳、红橘、HB柚中具有18条染色体的细胞,分别占其总数的78%、84%、68%、80%、70%。其余细胞染色体数目从16-21条不等,呈不恒定状态。2.核型研究显示:四季橘体细胞染色体核型公式为2n=2x=18=16m(2SAT)+2sm,第3对为近中部着丝粒染色体,其余均为中部着丝粒染色体,第1对染色体短臂上带有随体,核型类型为1B;金柑染色体核型公式为2n=2x=18=18m,无随体,均为中部着丝粒染色体,核型类型为1A;枳壳染色体核型公式为2n=2x=18=16m+2sm第6对为近中部着丝粒染色体,其余均为中部着丝粒染色体,无随体,核型类型为1B;红橘染色体核型公式为2n=2x=18=16m(2SAT)+2sm,2号染色体为近中着丝粒染色体,其他全为中部着丝粒染色体,7号染色体短臂上有随体,核型类型为1B;HB柚体细胞染色体核型公式为2n=2x=18=16m+2sm,第7对为近中部着丝粒染色体,其余为中部着丝粒染色体,无随体,核型类型为2B型。根据Stebbins的核型分类方法与Levitzky的核型对称原理推断,以上五种物种的核型类型都较原始且核型对称性较高,其中金柑最原始,依次为红橘、枳壳、四季橘和HB柚。3.利用Image-Pro Plus软件对前中期染色体进行带型定量分析,获得了每条染色体上从短臂到长臂,包括随体上DAPI荧光强度的变化图。纵座标表示DAPI荧光强度的灰度水平,横座标表示荧光在染色体上的相应位置,同时也反映了染色体的相对长度。不同的染色体对应了不同的曲线。综合所得的荧光波动图与肉眼观察结果,绘制出的染色体组带型模式图显示:四季橘、金柑、枳壳、红橘、耶柚分别有8、4、5、10、7条暗带。部分染色体具有相似的带型,同时,每一种属都具有代表自身特征的染色体标记。4.本实验构建了染色体的2D立体图,图片中可清晰直观地观察到染色体表面粗糙的立体形态,效果相似于共聚焦显微镜拍摄结果。清晰的染色体形态,为基因在染色体上的定位与拷贝数的观察、基因图谱的构建等工作奠定了基础。
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