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在HBV相关肝癌中,乙型肝炎大S蛋白(hepatitis B virus Large S protein, LHBs)和乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein, HBx)是肝癌组织中最常被检测到HBV相关蛋白。尽管已有部分研究证实LHBs和HBx可通过影响细胞本身信号通路来激活基因转录促进肝癌发生,然而对于LHBs和HBx在HBV相关肝癌(HBV-associated hepatocellular carcinoma, HBV-HCC)发生发展过程中的作用仍有许多不明之处。已有研究发现HBV转基因小鼠过表达LHBs,毒性剂量的SHBs在肝细胞内积累,持续的肝细胞损伤诱导肝脏条件性反应,如：炎症、再生、异常转录、非整倍体和最终进展为肝肿瘤。此外在几乎所有HBV转基因小鼠肝细胞被发现有HBsAg阳性的毛玻璃样改变,但在肝细胞恶性转化过程中(包括改变肝细胞结节,肝细胞腺瘤和肝细胞癌)广泛表达的HBsAg水平逐渐下调。虽然LHBs在转基因小鼠恶性转化中的间接作用得到证实,但LHBs对肝细胞功能的直接影响鲜见报道,本研究第一部分主要围绕LHBs在HBV相关肝癌发生过程中的作用及其机制展开。已有研究发现在HBV-HCC患者中有较高的肿瘤复发和转移率,肿瘤细胞获得失巢凋亡抵抗能力有利于肿瘤细胞局部转移和远处播散过程中存活,但是对于失巢凋亡抵抗的机制目前不甚明了。我们前期的研究发现在失巢凋亡过程中p34CDC2-相关的PITSLRE蛋白激酶(p110)的羧基端与P21活化蛋白激酶1(P21Activated Kinase1, PAK1)相互作用而抑制其活性,首次提出PAK1激酶活性在失巢凋亡中发挥核心功能。此外我们前期研究还发现HBx表达一方面可通过转录上调p1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β1,4-galactosyltransferaseⅠ, Ga1TI)来诱导细胞周期进展,另一方面还可通过下调Notch1信号活性来钝化衰老样生长抑制,从而促进HBV相关肝癌发生过程,而HBx与失巢凋亡的关系鲜见报道。而本研究则在我们以前发现的基础上进一步研究HBx与失巢凋亡的关系及PAK1在这过程中的作用。在本研究的第一部分,乙肝病毒表面糖蛋白总称为乙肝病毒表面抗原,包括大,中和小表面蛋白。其中,大部分HBV相关肝癌患者肝组织存在LHBs,LHBs转基因鼠能自发肝癌,但是LHBs在HBV相关肝癌发病过程中的作用还有待阐明。我们研究了LHBs在HBV相关肝癌发生中的作用和分子机制。肝癌细胞裸鼠移植瘤实验表明LHBs促进肿瘤形成,体外实验证实LHBs促进肝癌细胞增殖和克隆形成。通过对信号通路影响的分析提示LHBs激活PKCa/Raf1/Src/PI3K/Akt信号通路。在体外干扰Src酪氨酸激酶活性能逆转LHBs表达所诱导的促进细胞增殖、G1/S进展和凋亡抵抗。更重要的是,Src抑制剂塞卡替尼在体内、体外逆转LHBs促进细胞增殖和肿瘤形成。最后,在人肝癌肿瘤标本中验证了LHBs表达与pSrc(Y416)、pAkt (S473)、增殖标志(Ki67)正相关。结论：我们的结果提示LHBs通过活化Src/PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞肿瘤形成能力,提出了一个潜在的HBV相关肝癌发病机制,并为HBV相关肝癌的治疗提供了一个新的靶点。本研究的第二部分,HBV-HCC高死亡率的一个原因是高转移率,但其机制还不清楚。获得失巢凋亡抵抗是肿瘤细胞侵袭转移的前提。PAK1作为一个关键的丝氨酸/苏氨酸激酶参与协调细胞骨架动态改变、病毒复制和失巢凋亡抵抗。我们假设HBV感染赋予肝癌细胞PAK1依赖的失巢凋亡抵抗和转移能力。我们通过克隆形成试验和体外失巢凋亡试验研究HBV感染通过HBx赋予肝癌细胞失巢凋亡抵抗的能力。通过基于抑制Bcl2或PAK1活性,PAK1和Bcl2相互作用,转位,和PAK1调节Bcl2依赖的失巢凋亡实验来阐明HBx诱导失巢凋亡抵抗的分子机制。裸鼠皮下成瘤、体内失巢凋亡实验和基于人肝癌标本免疫组化染色的临床病理特征相关性综合分析PAK1介导的体外失巢凋亡抵抗的功能重要性。我们发现HBV通过HBx蛋白诱导PAK1线粒体转位和增加与Bcl2结合从而赋予细胞失巢抵抗和锚定非依赖性生长的能力。此外,PAK1的转录激活和激酶活性参与HBx诱导的体内外失巢凋亡抵抗。PAK1过表达与HBV感染、门静脉癌栓形成正相关,PAK1高表达还预示着肝癌病人的不良预后。结论：HBx通过PAK1转录活化诱导失巢凋亡抵抗是解释HBV相关肝癌转移的一个潜在分子机制。