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缓慢性心律失常(缓慢性心律失常,BA),指的是窦性心动过缓,房室交界性心率,心室自主心率,窦房传导阻滞,心房传导阻滞,房室传导阻滞,并以心脏的速率减慢为特点。心源性休克或心源性猝死的发生,缓慢性心律失常也是其主要原因之一。发生心动过缓,很难给出一个有意义的统计数据,但据世界卫生组织的资料显示,心脏和脑血管疾病已成为人类疾病的头号杀手,且心动过缓的发生率呈上升趋势。这种趋势近年明显,尤其在发展中国家。因此研究和发展抗缓慢性心律失常的药物并阐明其作用机理,具有很重要的社会价值和经济效益。本论文旨在通过动物、体外实验两个层次去深入探讨麻黄附子细辛汤对心脏的保护作用及机制研究。1目的观察CaM、CamK II在普萘洛尔性BA大鼠心脏中的表达及其与BA的关系,并观察麻黄附子细辛汤及其拆方组干预BA大鼠后,大鼠心肌细胞病理形态及上述指标变化,并分析该不同组别的变化是否具有差异性；同时将其作用效果与治疗BA疗效确切的药物阿托品进行比较。2方法70只SPF级SD大鼠,雌性35只,雄性35只,体重250-300克,按15mg/kg每日给予0.2毫升混悬液,盐酸普萘洛尔灌胃,建造大鼠心阳虚模型,连续给药14天。按照随机分组的原则,将70只大鼠随机分成7组,每组大鼠10只,每只体重100g给药液lml灌胃。分别设：正常对照组(灌胃等剂量0.5%羧甲基纤维素钠混悬液)；模型组(灌胃等剂量0.5%羧甲基纤维素钠混悬液)；阳性药物组(灌胃等剂量0.5%羧甲基纤维素钠混悬液,腹腔注射阿托品0.15mg/kg)；麻黄附子细辛汤及拆方设立三个不同的剂量组、分别是麻黄附子细辛汤组(MFX,4.8g/Kg/d)、麻黄+附子组(MF,4.0g/Kg/d)、麻黄+细辛组(MX,3.0g/Kg/d)、附子+细辛组(FX,3.2g/Kg/d)7个组。其中中药各个治疗组的汤剂中,分别加入0.5%羧甲基纤维素钠作为助悬剂。2.1观察各组大鼠一般生理活动。2.2麻醉下处死大鼠,取心脏,制作病理切片和免疫组化切片,进行形态学观察。2.3免疫组织化学法观察CaM、CamK II在BA大鼠心脏组织的表达。2.4逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法观察CaM、CamK II mRNA在BA大鼠心脏组织中的表达。3结果3.1普萘洛尔诱导BA大鼠模型的建立普萘洛尔诱导BA大鼠是一种相对简单易行、可靠性强、成模率高的动物模型制备方法,BA成模第2周开始可见大鼠体质量下降,蜷缩拱背,精神萎靡,毛发凌乱,活动及进食减少等气虚。心率指标观测1个月后正常组、模型组、阳性药物对照组、麻黄附子细辛组及拆方各组P<0.01,差异有显著统计学意义。服用麻黄附子细辛汤组药物观察中,其心率、血压、心电图指标均明显优于阳性药物对照组。普萘洛尔诱导慢性心律失常大鼠造模建造成功。3.2麻黄附子细辛汤对普萘洛尔诱导的缓慢性心律失常大鼠心脏组织结构影响麻黄附子细辛汤能够在一定程度上延缓或减轻大鼠缓慢性心律失常病理变化。3.3麻黄附子细辛汤对普萘洛尔诱导缓慢性心律失常大鼠心脏组织中CaM、CamK II蛋白表达的影响模型组CaM和CamK II的表达均有不同程度的降低,分别为对照组的64.7%和51.9%,与对照组相比差异显著(p<0.05)。使用西药制剂阿托品治疗后,CaM和CamK Ⅱ的表达均升高,分别为对照组的84.6%和90.4%。使用中药复方MFX治疗后,CaM和CamK II的表达均上升明显,为对照组的98.3%和92.1%。当使用拆方药剂后,MF组CaM和CamK II的表达大幅度上升,分别是对照组的7.3%和95.7%,而使用MX和XF后,CaM和CamK的表达虽然有一定的上升趋势,但上升的幅度较小,分别为69.2%、73.3%和79.2%、70.8%,与对照组相比差异显著。3.4麻黄附子细辛汤对普萘洛尔诱导缓慢性心律失常大鼠心脏组织中CaM、CamK IImRNA表达的影响模型组CaM mRNA的表达大幅度降低,为对照组的40.5%,与对照组相比差异显著(p<0.05)。使用ATR治疗后,CaM mRNA的表达量上升,为对照组的66.3%,与对照组相比差异不显著。而使用中药复方MFX治疗后,CaMmRNA的表达量上升明显,为对照组的82.6%,与对照组CaM mRNA的表达量相比无显著差异(p>0.05)。使用不同搭配组成的拆方MF、MX和XF治疗后发现,三组拆方药剂均能使CaM mRNA的表达上升,但MF拆方组上升最为明显,为对照组的91.8%,与对照组相比差异不显著(p>0.05)。而MX和XF拆方组上升较少,分别为对照的65.3%和61.8%,与对照组相比差异显著(p<0.05)。而CamK II mRNA的表达模型组与对照组相比也显著下降,为对照组的45.0%,二者之间差异显著(p<0.05)。使用ATR治疗后,CamK IImRNA的表达上升明显,为对照组的117.0%。使用复方汤药MFX治疗后,CamK II mRNA的表达上升,为对照组的89.7%。当使用拆方组治疗后,各组CamK II mRNA的表达均上升,但MF组上升显著,为对照组的114.0%,而MX和XF组上升较少,为对照组的51.8%和52%,与对照组相比差异显著(p<0.05)。4结论麻黄附子细辛汤具有一定的增加心脏传导功能和对心肌有很好的保护作用。组间比较发现,麻黄附子细辛汤组大鼠的心肌细胞无变性现象及充血和瘀血现象,病理镜下结果观察接近正常组,而阿托品组心肌组织学观察颗粒变性,细胞核周围的胞浆溶解现象依然存在,而其他拆方组虽均未达到正常组水平,但从心肌细胞镜下比较来看,MF组组织结构的改变优于MX组和FX组组织结构。CaM和CamK II在心肌细胞的细胞核和细胞核周围表达为强阳性,在细胞质中表达为弱阳性。此外,CaM在心肌纤维中表达还出现了区域性表达的现象,但并无一定的规律。Ca2+、CaM激活CamK lI后,可使转录因子CCAATE/enhancer binding Protein (C/EBP)磷酸化,以调节某些蛋白合成,如果细胞核内的CamK II-δ B过度激活,可导致心肌细胞肥大,在心肌肥厚心肌病动物模型可观察到CamK II表达的增加。使用复方汤药MFX治疗后,CamK mRNA的表达上升较西药制剂阿托品显著,当使用拆方组治疗后,各组CamK II mRNA的表达均上升,但MF组上升最多。