单分散芹菜素分子印迹微球的制备及分子识别性能研究

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分子印迹技术(Molecular Imprinting Technology,MIT)是以目标分子为模板,制备对其具有识别能力的分子印迹聚合物(Molecularly Imprinted Polymers, MIPs)材料的技术。MIPs作为一种新型分子识别材料,其构效预定性、特异识别性以及广泛实用性使其在抗体模拟、固相萃取、分离纯化、生物传感器及模拟酶催化等领域均有十分广阔的应用前景。   中药是一个复杂的体系,其所包含的化合物结构类型多样,含量悬殊且许多成分未知,甚至某些中药中还含有有毒成分。因此,对中药中具有特定药效的活性成分的快速鉴定以及分离纯化是目前制约我国中药快速发展和走向国际的主要因素,开展从复杂中药体系中选择性地分离富集有效成分的研究具有重要的应用价值和现实意义。   本文通过改进的无皂乳液聚合法制备得到了单分散聚苯乙烯微球,并以之为种球,芹菜素(Apigenin,API)为模板分子,2-乙烯基吡啶(2-Vpy)为功能单体,通过单步溶胀聚合制备得到了多孔单分散芹菜素分子印迹聚合物微球(Apigenin Monodispersedmolecularly imprinted polymer microspheres,API-MMIPM),并优化了其的合成条件。运用傅立叶-红外光谱仪(FT-IR)、紫外可见光谱仪(UV-vis)、扫描电镜(SEM)、热重分析仪(TG-DSC)等对API-MMIPM进行了形貌和结构表征。通过紫外光谱考察了API与2-Vpy的非共价作用,并采用静态和动态结合实验考察了API-MMIPM对底物分子的结合特性、吸附热力学、吸附动力学及分子识别性能,揭示了 API-MMIPM的印迹、识别、传质和吸附机理。   主要结论如下:   1.采用改进的无皂乳液聚合法,在乙醇-水体系中成功制备亚微米级单分散聚苯乙烯微球。制备的最佳条件为:苯乙烯为2mL,过硫酸钾(KPS)0.025g(质量比为0.068%),乙醇10mL,水25 mL,反应时间24h,反应温度70℃。产品单分散性好,粒径均匀、大小适中,转化率高,可以作为种球,进一步用于分子印迹聚合。   2.以芹菜素为模板分子,通过单步溶胀聚合法在水相中制得单分散多孔结构的API-MMIPM,并运用扫描电镜(SEM)等对其进行了形貌表征。制备的最佳条件为:0.1 mmolAPI,3.2 mmolEDMA,0.8mmol二乙烯基吡啶(2-Vpy),3mL四氢呋喃(THF),0.051 g邻苯二甲酸二丁酯(DBP),30 mL0.1%十二烷基硫酸钠(SDS)和1%聚乙烯醇(PVA)混合水溶液,0.5 mL种球在65℃反应20 h。   3.静态平衡结合实验表明,API-MMIPM对API有良好的亲和性和选择性吸附能力。Scatchard分析表明,API-MMIPM中形成了两类不同的结合位点,高亲和力结合位点的离解常数Kd1=0.087μmol/mL,最大表观结合量Qmax1=9.17μmol/g;低亲和力结合位点的离解常数Kd2=1.405μmol/mL,最大表观结合量Qmax2=25.75μmol/g;印迹效率为42.63%。等温吸附实验表明,在室温(25℃)条件下,API的吸附更倾向于符合Freundlich模型。   4.吸附动力学实验表明, API-MMIPM在前40 min内对API的吸附速率非常快,且在约140 min后基本达到饱和吸附。且 API-MMIPM对API吸附动力学符合准二级反应动力学方程;吸附热力学表明,API-MMIPM对API的吸附过程是放热过程,并自发进行。   5.对不同竞争底物的选择性吸附实验表明,API-MMIPM对API的吸附量Q和分配系数KD都大于对其他底物的Q和KD,说明API-MMIPM具有良好的特异识别能力。再生性实验证明API-MMIPM具有较好的再生性能,可多次重复使用。
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