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目的:明确高迁移率族蛋白B1(high mobility group box B1,HMGB1)对Treg、Th17细胞凋亡和分化的影响,探讨HMGB1影响动脉粥样硬化患者Treg/Th17细胞失衡的机制。方法:(1)依据冠状动脉造影结果及排除标准筛选病例,收集患者肘静脉抗凝血,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。(2)采用Annexin-V-FITC单染法检测动脉粥样硬化组(atherosclerosis,AS)及冠脉造影正常对照组(normal coronary arteries,NCA)患者PBMC中Treg、Th17细胞凋亡率。(3)qRT-PCR检测AS组及NCA组PBMC中HMGB1基因表达水平。(4)用重组HMGB1(recombinant HMGB1,rHMGB1)以不同浓度和时间梯度刺激NCA组PBMC,流式检测Treg和Th17细胞比例变化。(5)用rHMGB1刺激AS组和NCA组PBMC,通过流式检测Treg和Th17细胞比例和qRT-PCR检测Foxp3、RORC mRNA水平,比较rHMGB1对两组患者Treg和Th17细胞影响的差异。(6)用rHMGB1对NCA组PBMC进行细胞刺激试验,观察rHMGB1对Treg和Th17细胞凋亡的影响。(7)采用免疫磁珠法分选NCA组PBMC中的初始CD4~+T细胞,通过细胞因子诱导分化实验来分析rHMGB1对Treg和Th17细胞分化的影响。结果:(1)AS组Treg细胞凋亡率显著高于NCA组(p<0.01),而NCA组和AS组Th17细胞凋亡率无明显差异(p>0.05)。(2)AS组PBMC中HMGB1 mRNA水平显著高于NCA组(p<0.01)。患者PBMC中HMGB1 mRNA水平与外周血Treg细胞凋亡率呈显著正相关(r=0.660,p<0.001),而与Th17细胞凋亡水平无明显相关性(r=0.062,p>0.05)。(3)rHMGB1以不同浓度和时间刺激PBMC使Treg细胞比例显著降低,使Th17细胞比例显著升高,其中100ng/ml浓度(p<0.01)rHMGB1和24h作用时间(p<0.01)分别为最佳作用浓度和时间。(4)相比对照组,用100ng/ml rHMGB1作用24h后,NCA组和AS组两组PBMC中Treg细胞表达水平(p<0.01)以及相关转录因子Foxp3 mRNA水平均显著降低(p<0.01),而Th17细胞表达水平(p<0.01)以及相关转录因子RORC mRNA水平均显著升高(p<0.01)。AS组Treg细胞减少的程度(p<0.01)和Foxp3 mRNA水平降低(p<0.01)的程度均显著高于NCA组;AS组Th17细胞增多的程度(p<0.01)和RORC mRNA水平升高的程度(p<0.05)均显著高于NCA组。(5)rHMGB1刺激使Treg细胞凋亡率显著升高(p<0.01),而对Th17细胞凋亡水平未产生明显影响(p>0.05)。(6)NCA组初始CD4~+T细胞在给予细胞因子等诱导条件之前,Treg细胞和Th17细胞比例分别为(1.5±0.45)%和(0.9±0.38)%;当初始CD4~+T细胞在TGF-β1和IL-2作用下(对照组)诱导7天后,CD4~+CD25~+CD127-Treg细胞占CD4~+T细胞中的比例显著升高至(29.8±1.75)%;当初始CD4~+T细胞在IL-1β、IL-6和IL-23作用下(对照组)诱导7天后,CD4~+IL-17~+Th17细胞占CD4~+T细胞中的比例显著升高至(8.0±0.84)%。而加入了rHMGB1的处理组中Treg细胞表达率为(20.6±1.41)%,显著低于对照组(p<0.01);加入了rHMGB1的处理组中Th17细胞表达率为(12.1±0.81)%,显著高于对照组(p<0.05)。处理组培养液上清中IL-10浓度显著低于对照组(p<0.05);处理组培养液上清中IL-17A浓度显著高于对照组(p<0.01)。结论:(1)细胞实验表明HMGB1能影响AS患者外周血中Treg/Th17细胞平衡,促进该平衡向促炎的Th17细胞一侧偏移。(2)研究证实HMGB1能促进Treg细胞凋亡,从而使AS患者外周血中Treg细胞凋亡增加。(3)HMGB1能促进Th17细胞分化,抑制Treg细胞分化。(4)HMGB1可能通过促进Treg细胞凋亡,促进Th17细胞分化和抑制Treg细胞分化来影响AS患者外周血中Treg/Th17细胞平衡。