【摘 要】
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将已构建好的抗人乳腺癌基因工程抗体免疫毒素MG/ScFv-PE40基因进行原核表达,并对诱导表达条件、表达量、包涵体的分离纯化、溶解和复性进行探索,得到重组蛋白MG/ScFv-PE40,W
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将已构建好的抗人乳腺癌基因工程抗体免疫毒素M<,4>G<,3>/ScFv-PE40基因进行原核表达,并对诱导表达条件、表达量、包涵体的分离纯化、溶解和复性进行探索,得到重组蛋白M<,4>G<,3>/ScFv-PE40,Western blot证实其符合重组蛋白的结构要求,进而研究其对人乳腺癌细胞的靶向作用及其体外细胞杀伤活性,从而为乳腺癌的生物治疗提供新的手段奠定实验基础.方法:1、表达体系的构建:将M<,4>G<,3>/ScFv-PE40用NcoⅠ、HindⅢ从T载体上双酶切下来,与同样双酶切后的载体pET26b(+)相连,转化克隆菌株DH5 α,酶切鉴定正确后转化BL21(DE3)溶原菌;2、优化表达目的蛋白及鉴定:以不同浓度的IPTG诱导ScFv-PE40表达,做SDS-PAGE凝胶电泳分析其分子量大小、表达量,Western blot证实其符合重组蛋白的结构要求;3、ScFv-PE40的复性:大量表达目的蛋白,进行包涵体的分离纯化、溶解和复性探索;4、ScFv-PE40活性研究:设计体外细胞亲和性实验及体外细胞毒实验以研究其对人乳腺癌细胞的靶向作用及其体外细胞杀伤活性.结论:1、成功制备抗人乳腺癌基因工程抗体免疫毒素M<,4>G<,3>/ScFv-PE40.2、重组免疫毒素M<,4>G<,3>/ScFv-PE40对T47D人乳腺癌细胞有较好的靶向细胞杀伤作用,有可能成为乳腺癌治疗的有效途径.
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