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本实验针对如何提高腹腔镜进行山羊活体采卵和体外受精效果开展了多方面的研究,以便完善“活体采卵—体外受精”生产体外胚胎的技术体系,进而提高体外胚胎生产的效率。用屠宰厂采集的卵巢作为实验材料,比较不同型号的采卵针对卵母细胞回收效果的影响,结果表明采卵针型号对卵母细胞回收率和可用率均有较大影响。9号和12号针的回收率分别为66.78%和62.41%显著高于7号针的52.63%(P<0.05);可用率分别为63.59%和68.82%也显著高于7号针的55%(P<0.05)。9号与12号针在卵母细胞回收率,可用率方面差异均不显著(P>0.05),说明这两种型号的针较适宜作为山羊活体采卵用针。采用间隔两周,重复三次的采卵方案,比较常规手术法与腹腔镜法活体采卵(LOPU Laparoscopic Ovum Pick-up)对活体采卵效果及供试羊生殖器官损伤的影响。结果表明常规手术法采卵与LOPU在卵母细胞回收率(76.47%对74.81%)及可用率(75.24%对72.45%)方面差异不显著(P>0.05)。但常规手术法对供试羊的生殖器官损伤较大,第三次采卵时全部发生粘连,对采卵操作产生了较大影响。将供试羊分为三组,重复三次LOPU,比较不同采卵间隔时间对活体采卵效果及供试羊生殖器官损伤情况的影响,结果间隔一周的每次每只卵泡数(12.08个)、每次每只获卵数(8.75个),均显著低于间隔两周(15.58个,11.97个)和三周组(14.92个、11.42个)(P<0.05)。卵母细胞回收率(分别为72.41%、76.47%、78.29%)与可用卵率(分别为74.28%、75.24%、74.45%)三组间无显著差异(P>0.05)。间隔一周重复活体采卵对卵巢的损伤较大,卵巢表面有较多的血斑;间隔2周组卵巢基本能够恢复正常,但卵巢表面也有少量的血斑;间隔3周组卵巢能够恢复正常。综合考虑活体采卵的间隔时间以两周为宜。山羊体外受精研究的结果表明:成熟液中添加10~60ng/mlEGF各组的极体率(90.67~88.46%)与未添加组(75.68%)相比较,均有显著提高(P<0.05),尤以添加20ng/ml的极体率最高(92.86%),但添加EGF的各组之间极体率无显著差异。成熟液中添加EGF明显提高了卵母细胞受精后的发育能力。发情绵羊血清可以替代发情山羊血清作为山羊精子的获能物质,卵裂率达60.42%;受精液中添加5%、10%、20%发情羊血清的三组卵裂率分别为58.33%、59.72%和62.50%,显著高于而不含发情羊血清组(0%,P<0.01)。受精液中添加10μg/ml和20μg/ml肝素组的卵裂率分别为87.69%和85.71%(P>0.05),两组间无显著差异,但这两组的卵裂率均极显著地高于不含肝素组(59.02%,P<0.01)。发育液中添加1%EAA组的囊胚率显著地高于添加2%EAA组(29.17%VS17.10%,P<0.05)。5%CO2的空气与混合气(5%CO2+5%O2+90%N2)的桑椹胚率无显著差异(P>0.05),但混合气的囊胚率为30.16%,显著高于5%CO2的空气的16.27%(P<0.05),说明低氧条件(混合气)对囊胚的形成有促进作用。发育液中添加5~40ng/ml的EGF各组与对照组(不含EGF组)相比较,囊胚率均有显著提高(P<0.05),但添加80ng/mlEGF组的囊胚率急剧下降到了5.50%,显著低于对照组(15.29%,P<0.05),极显著地低于添加5~40ng/mlEGF的各组(28.75%、32.76%、31.25%、26.78%,P<0.01)。离体卵巢获得的卵母细胞与活体采卵相比较,在卵裂率和桑椹胚率方面无显著差异,但二者的囊胚率差异显著(P<0.05),分别为30.16和14.71%。活体采卵获得的卵母细胞进行体外受精后,将40枚早期胚胎移植给8只同期发情的受体羊。移植后两个月用B超进行妊娠检查,确定一只羊妊娠,妊娠率为12.5%。