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围产期缺血缺氧脑病(Neonatal hypoxic-ischemic brain disorders，HIBD)是新生儿围产期的一种常见脑部疾病。不同程度的HIBD表现为不同程度的神经系统后遗症。最常见是脑瘫、自闭症、精神运动发育迟滞、注意力缺陷多动症、抽动症、癫痫，并伴发一系列认知功能障碍、精神行为心理异常，如睡眠与进食障碍、注意力缺陷、脾气暴躁以及攻击与自伤行为等等，属于神经系统和精神疾病共病的范畴。对于新生儿缺血缺氧脑病的治疗，应从根本上改变神经缺损情况和缺血缺氧内环境。新生儿缺氧缺血脑病(Hypoxia-ischemic encephalopathy，HIE)的发病机制较为复杂，是多种发病因素协同作用的结果，所以在拟定治疗方案时多采取综合治疗的原则，目前在西医学上的常规治疗主要包括急性期给氧、增加脑血流、降低颅内压等，恢复期配合康复锻炼。随着祖国传统医学的不断发展和进步，中医在治疗HIE上取得了突破性的进展，从整体观念出发，认识到儿童脑病病位在脑，脑为元神之府。所谓元神，广义指人体生命活动的总称，狭义指人体所表现的神志意识、知觉、运动等。靳三针治疗儿童脑病以头部穴组为主，其临床疗效肯定且受到业内普遍认可。从调元神和调心神人手，作用于脏腑和经络，以达到调和气血、调和阴阳，促进受损的脑部神经功能修复的作用，主要方法包括针刺、艾灸、推拿按摩、中药等。
针刺作为传统中医的重要组成部分，以其方便、高效的特点被人们广泛接受和应用。近年来也有研究发现针刺能够有效地改善HIE模型的后遗症状，例如发育迟缓、脑瘫、癫痫等。事实证明针刺不仅能够改善局部症状同时可以调理脏腑，调节整体，经过大量临床研究证明HIE的针刺干预越早、刺激强度越大，治疗效果越好。靳三针是靳瑞教授在传统针法的基础上总结而来的一套新的治疗方法，靳三针的名字由来主要是因为靳瑞教授在治疗疾病时经常以三处穴位为一组处方，并且形成了较好的治疗效果。靳三针是岭南针灸的代表流派，在临床上靳三针对小儿脑病开展了多项研究，成果丰硕，其治疗小儿自闭症等已被国家批准推广应用。
研究证实，缺血缺氧脑损伤的发生机制与脑部神经细胞形态密切相关，主管认知学习记忆的海马区神经元细胞的存活或死亡决定了缺血缺氧脑损伤后的程度。细胞主要以细胞凋亡、细胞自噬和细胞焦亡三种方式参与HIBD的发生发展过程。前期研究发现，抑削HIBD神经细胞凋亡，在氧化应激条件下，细胞自噬可作为一种保护机制，有效改善缺血缺氧脑损伤。针刺靳三针头穴已被证实能有效治疗HIE，但针刺如何通过调控HIBD神经元细胞自噬从而改善HIBD的机制尚未明确。因此建立良好的、可靠的病理模型是证明针刺治疗HIE有效的关键步骤，以期全面阐明针刺治疗儿童脑病的机制。
本实验主要是通过建立新型的HIBD模型大鼠探讨靳三针治疗HIE的病理机制，观察模型鼠海马组织中自噬的变化及mTOR的表达。
目的：
应用宫内窘迫法建立新型的HIBD大鼠模型，观察模型组、针刺组、激活剂组、抑制剂组、针刺加激活剂组、针刺加抑制剂组体重的变化以及海马组织中自噬的表达情况，检测海马组织中mTOR的表达，探讨靳三针治疗HIE的机制，为靳三针治疗HIE提供确切的理论依据。
方法：
动物模型的建立：采用宫内窘迫法建立HIBD大鼠模型，用止血钳夹住孕鼠的双侧子宫动脉，延迟10分钟进行剖宫产手术，严格模拟临产期宫内缺氧缺血状态，建立HIBD大鼠模型。按照分层随机法将动物分为6组：模型组(Model)、针刺组(Acupuncture)、激活剂组(RAPA)、抑制剂组(3-MA)、针刺加激活剂组（Acu+RAPA）、针刺加抑制剂组(Acu+3-MA)，每组8只，模型鼠喂养至第14天时开始干预，每天一次，连续14天。针刺选用靳三针头部调神穴组（智三针、双侧颞三针、脑三针），每穴刺激10次不留针;激活剂组予以腹腔注射雷帕霉素(2.5mg/kg)，抑制剂组予以腹腔注射3-MA(2.5mg/kg)，针刺加激活剂组给予雷帕霉素腹腔注射后进行针刺干预(2.5mg/kg)，针刺加抑制剂组给予3-MA腹腔注射后进行针刺干预(2.5mg/kg)，模型组正常饲养，不采取任何干预措施。所有动物在HIBD造模后第28天取材。
实验指标的测定：
一、于HIBD造模后第14天、21天、28天对各组幼鼠进行称重并记录;
二、WB检测海马组织中mTOR的表达情况;
三、透射电镜观察海马组织中自噬的表达情况;
结果：
一、体重结果表明，造模后第14天，各组大鼠之间体重无明显差异(P＞0.05)，具有可比性。造模后第21天，各组大鼠体重较第14天增加，其中针刺组、抑制剂组、针刺加抑制剂组与模型组比较，大鼠体重差异无统计学意义(P＞0.05)，激活剂组、针刺加激活剂组较模型组HIBD大鼠体重轻，差异有统计学意义(*P＜0.05)，针刺加激活剂组HIBD大鼠的体重比针刺组相比体重轻，差异具有统计学意义(＃P＜0.05)，针刺加激活剂组与激活剂组相比，HIBD大鼠体重差异无统计学意义;造模后第28天，各组大鼠体重与第14天相比均有增长，其中针刺组、抑制剂组、针刺加抑制剂组与模型组比较各组间大鼠体重无差异(P＞0.05)，激活剂组、针刺加激活剂组大鼠体重较模型组轻，差异具有统计学意义(△P＜0.05)，针刺加激活剂组大鼠体重比针刺组大鼠体重轻，且差异具有统计学意义(＃P＜0.05)，针刺加激活剂组大鼠与激活剂组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。
二、WB检测大鼠海马组织中mTOR的表达情况，结果显示，针刺组与模型组相比mTOR表达明显降低，差异具有统计学意义(*P＜0.05);激活剂组与模型组相比mTOR表达降低，但是为表现出统计学差异(P＞0.05);抑制剂组与模型组相比较mTOR表达显著降低，差异具有统计学意义(*P＜0.05);针刺加激活剂组与激活剂组相比较，mTOR表达明显降低，差异具有统计学意义(△P＜0.05);针刺加抑制剂组与抑制剂组相比较mTOR的表达明显增加，差异具有统计学意义(＃P＜0.05)。
三、实验结果显示给予针刺后海马组织内自噬小体的数量增多，自噬的表达增加。
结论：
一、mTOR作为一种免疫抑制剂会影响HIBD大鼠体重的增长，而针刺干预调控自噬的同时，能有效改善免疫系统能力。
二、针刺干预对mTOR的表达具有调控作用，并且能够增加mTOR在海马组织中的含量。
三、针刺能够促进海马组织自噬的表达，这种机制可能与mTOR调控来完成的。
针刺作为传统中医的重要组成部分，以其方便、高效的特点被人们广泛接受和应用。近年来也有研究发现针刺能够有效地改善HIE模型的后遗症状，例如发育迟缓、脑瘫、癫痫等。事实证明针刺不仅能够改善局部症状同时可以调理脏腑，调节整体，经过大量临床研究证明HIE的针刺干预越早、刺激强度越大，治疗效果越好。靳三针是靳瑞教授在传统针法的基础上总结而来的一套新的治疗方法，靳三针的名字由来主要是因为靳瑞教授在治疗疾病时经常以三处穴位为一组处方，并且形成了较好的治疗效果。靳三针是岭南针灸的代表流派，在临床上靳三针对小儿脑病开展了多项研究，成果丰硕，其治疗小儿自闭症等已被国家批准推广应用。
研究证实，缺血缺氧脑损伤的发生机制与脑部神经细胞形态密切相关，主管认知学习记忆的海马区神经元细胞的存活或死亡决定了缺血缺氧脑损伤后的程度。细胞主要以细胞凋亡、细胞自噬和细胞焦亡三种方式参与HIBD的发生发展过程。前期研究发现，抑削HIBD神经细胞凋亡，在氧化应激条件下，细胞自噬可作为一种保护机制，有效改善缺血缺氧脑损伤。针刺靳三针头穴已被证实能有效治疗HIE，但针刺如何通过调控HIBD神经元细胞自噬从而改善HIBD的机制尚未明确。因此建立良好的、可靠的病理模型是证明针刺治疗HIE有效的关键步骤，以期全面阐明针刺治疗儿童脑病的机制。
本实验主要是通过建立新型的HIBD模型大鼠探讨靳三针治疗HIE的病理机制，观察模型鼠海马组织中自噬的变化及mTOR的表达。
目的：
应用宫内窘迫法建立新型的HIBD大鼠模型，观察模型组、针刺组、激活剂组、抑制剂组、针刺加激活剂组、针刺加抑制剂组体重的变化以及海马组织中自噬的表达情况，检测海马组织中mTOR的表达，探讨靳三针治疗HIE的机制，为靳三针治疗HIE提供确切的理论依据。
方法：
动物模型的建立：采用宫内窘迫法建立HIBD大鼠模型，用止血钳夹住孕鼠的双侧子宫动脉，延迟10分钟进行剖宫产手术，严格模拟临产期宫内缺氧缺血状态，建立HIBD大鼠模型。按照分层随机法将动物分为6组：模型组(Model)、针刺组(Acupuncture)、激活剂组(RAPA)、抑制剂组(3-MA)、针刺加激活剂组（Acu+RAPA）、针刺加抑制剂组(Acu+3-MA)，每组8只，模型鼠喂养至第14天时开始干预，每天一次，连续14天。针刺选用靳三针头部调神穴组（智三针、双侧颞三针、脑三针），每穴刺激10次不留针;激活剂组予以腹腔注射雷帕霉素(2.5mg/kg)，抑制剂组予以腹腔注射3-MA(2.5mg/kg)，针刺加激活剂组给予雷帕霉素腹腔注射后进行针刺干预(2.5mg/kg)，针刺加抑制剂组给予3-MA腹腔注射后进行针刺干预(2.5mg/kg)，模型组正常饲养，不采取任何干预措施。所有动物在HIBD造模后第28天取材。
实验指标的测定：
一、于HIBD造模后第14天、21天、28天对各组幼鼠进行称重并记录;
二、WB检测海马组织中mTOR的表达情况;
三、透射电镜观察海马组织中自噬的表达情况;
结果：
一、体重结果表明，造模后第14天，各组大鼠之间体重无明显差异(P＞0.05)，具有可比性。造模后第21天，各组大鼠体重较第14天增加，其中针刺组、抑制剂组、针刺加抑制剂组与模型组比较，大鼠体重差异无统计学意义(P＞0.05)，激活剂组、针刺加激活剂组较模型组HIBD大鼠体重轻，差异有统计学意义(*P＜0.05)，针刺加激活剂组HIBD大鼠的体重比针刺组相比体重轻，差异具有统计学意义(＃P＜0.05)，针刺加激活剂组与激活剂组相比，HIBD大鼠体重差异无统计学意义;造模后第28天，各组大鼠体重与第14天相比均有增长，其中针刺组、抑制剂组、针刺加抑制剂组与模型组比较各组间大鼠体重无差异(P＞0.05)，激活剂组、针刺加激活剂组大鼠体重较模型组轻，差异具有统计学意义(△P＜0.05)，针刺加激活剂组大鼠体重比针刺组大鼠体重轻，且差异具有统计学意义(＃P＜0.05)，针刺加激活剂组大鼠与激活剂组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。
二、WB检测大鼠海马组织中mTOR的表达情况，结果显示，针刺组与模型组相比mTOR表达明显降低，差异具有统计学意义(*P＜0.05);激活剂组与模型组相比mTOR表达降低，但是为表现出统计学差异(P＞0.05);抑制剂组与模型组相比较mTOR表达显著降低，差异具有统计学意义(*P＜0.05);针刺加激活剂组与激活剂组相比较，mTOR表达明显降低，差异具有统计学意义(△P＜0.05);针刺加抑制剂组与抑制剂组相比较mTOR的表达明显增加，差异具有统计学意义(＃P＜0.05)。
三、实验结果显示给予针刺后海马组织内自噬小体的数量增多，自噬的表达增加。
结论：
一、mTOR作为一种免疫抑制剂会影响HIBD大鼠体重的增长，而针刺干预调控自噬的同时，能有效改善免疫系统能力。
二、针刺干预对mTOR的表达具有调控作用，并且能够增加mTOR在海马组织中的含量。
三、针刺能够促进海马组织自噬的表达，这种机制可能与mTOR调控来完成的。