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研究背景皮肤创面愈合是一个极其复杂的病理、生理过程,需要多种细胞、细胞因子共同参与并且涉及炎症反应、血管生成、肉芽组织形成和组织重塑,其中皮肤损伤后皮肤表面的完整性需要表皮细胞再生以维持。骨髓间充质干细胞在体外分离、培养后仍然保持了多向分化能力和自我更新能力,其中向表皮细胞分化已经被广大研究者应用于创面修复[1]。骨桥蛋白属于细胞外基质蛋白,过去的大量研究表明在参与创面修复的过程中,骨桥蛋白对炎症细胞、内皮细胞等各种细胞作用的发挥都起着重要调控作用。既往研究发现,创面组织内聚集的大量骨髓间充质干细胞与创面局部高表达的骨桥蛋白存在密切的联系。研究骨髓间充质干细胞在分化为表皮细胞、促进创面愈合过程中骨桥蛋白发挥的重要作用,无疑对促进损伤皮肤结构和功能的完全修复是十分必要的。目的以骨桥蛋白基因敲除小鼠和野生型小鼠作为研究对象,探讨骨桥蛋白在骨髓间充质干细胞体内、体外分化为表皮细胞过程中发挥的作用。方法1.体外实验:实验分两个组,野生型组(WT)和骨桥蛋白基因敲除型组(KO),分离培养野生型和基因敲除型新生鼠(鼠龄1天)的BMSCs,流式鉴定其纯度后,取第3代分别在表皮转化培养体系中孵育,通过镜下观察、流式细胞检测、免疫荧光染色、Western Blot等方法,比较两组表皮细胞标志物角质形成蛋白14(CK14)表达水平的差异。2.动物实验:动物实验分为4个组:野生型小鼠创周注射GFP-MSCs组,即WT/MSCs组,按相同的方法,其他3个组分别为WT/PBS组,KO/MSCs组,KO/PBS组。每组均采用8只雄鼠,鼠龄在6?8周左右,体重20?25g;将分离培养的GFP-MSCs和PBS按以上的分组注射到创周。从术后第1天开始,连续7天创面拍照,计算每组的创面愈合率,并在小动物成像仪下观察GFP-MSCs向创面迁移的情况;分别在术后第3、5、7天切取创面组织进行HE染色观察创面生长变化,免疫荧光染色检测GFP-MSCs向表皮细胞分化的情况。结果1.分离培养的BMSCs纯度超过90%,细胞形态呈梭形或成纤维细胞样;2.BMSCs体外诱导分化后免疫荧光染色结果显示,诱导分化后WT和KO组的细胞均表达CK14,WT组的表达阳性率明显高于KO组(P<0.01);3.BMSCs体外诱导分化后WB检测CK14的表达量,WT组明显高于KO组(P<0.01);4.WT/MSCs组创缘注射的GFP-MSCs向创面中心迁移的速度较KO/MSCs组快,并且迁移的数量也较KO/MSCs组多(P<0.01);5.动物实验:以WT/PBS组作为对照,KO/PBS组的创面愈合速度较对照组慢(P<0.05),同样以WT/PBS组作为对照,WT/MSCs组的创面愈合速度较对照组快(P<0.05);6.创周注射的GFP-MSCs可以分化为表皮细胞,其分化能力KO/MSCs组明显弱于WT/MSCs组(P<0.05)。结论1.骨桥蛋白能够增强骨髓间充质干细胞的迁移能力;2.骨髓间充质干细胞在体内外均可被诱导分化为表皮细胞,骨桥蛋白具有促进其分化的作用;3.骨桥蛋白通过诱导骨髓间充质干细胞分化为表皮细胞从而促进创面愈合。