论文部分内容阅读
微生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称,虽然其体积微小,但其作用却不容忽视。研究利用好微生物的资源,可以增强人类对预防疾病、提升经济效益。而土壤是微生物的大本营,地球上绝大多数微生物都来自于土壤中。所以研究土壤微生物是研究微生物的基础。随着人们对微生物学的重视提升,发展微生物资源以及利用微生物抗菌性质、研究其抗菌机制变得越来越重要。 本文成功的从南太行山地区采集土壤,本试验选取了3种不同的分离培养基结合现有纯培养技术从该地区采集土壤中分离出306株原核微生物,并提取它们的DNA,通过PCR技术,成功扩增其基因序列。再通过将序列在基因银行中进行BLAST比对分析这些菌株的多样性。其中,306株原核微生物分布于4个目,6个科,7个属。比对发现该地区最优势菌群是芽孢杆菌,共有68株,占到总菌数量的22%,其次为节杆菌属,共计57株,是该地区最优势的放线菌类群第三是假单胞菌属(Pseudomonas sp.)有7株。从分离菌株的数量和分布情况来看,南太行山地区地区土壤可培养原核微生物的优势种群分别是属于细菌的芽孢杆菌属,以及属于放线菌的节杆菌属。本研究从这些菌株中分离得到3株候选菌株,将其基因序列BLAST比对,同源性低于97%,说明该地区土壤中微生物资源丰富。 试验将所分离菌株全部保存活化后,选用金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠埃希氏菌(E.coli)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)、枯草芽孢杆菌(Bscillussubiilis)作为指示菌株。经过初筛、复筛后得到64株具有明显抗性的菌株。其中对金黄色葡萄球菌产生抗性菌株最多,占总菌数的8.4%;其次为对枯草芽孢杆菌有抗性菌株,数量为22株,占菌株总数的7.1%;对嗜水气单胞菌有抗性的菌株有10株,占菌株总数的3.2%;有6株菌种对大肠杆菌有抗性,占菌株总数的1.9%。同时抗多种指示菌的菌株为7株,占抗性菌株总数的10.9%。试验,选取4株具有抗性的菌株研究其抗菌机制。 对具有抗性的4株菌种抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和嗜水气单胞菌的机制进行初步探讨。将4株试验菌(终浓度为1/2MIC)作用于4种指示菌,同时设置指示菌为空白对照组。使用聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)的方法,检测试验菌对指示菌菌体蛋白含量的影响。检测发现试验菌对指示菌的蛋白都产生了影响。试验检测了指示菌对大肠杆菌的琥珀酸脱氢酶(SDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和Na+K+-ATP酶酶活的影响,发现只有3号试验菌株对大肠杆菌代谢途径产生影响。通过PCR扩增金黄色葡萄球菌gyr A基因,并使用HinfⅠ酶酶切其片段,电泳结果无法观察到两条片段,说明试验菌株对金黄色葡萄球菌的碱基序列产生了影响。