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E-64被证明能够降低绵羊卵母细胞在体外成熟过程中卵丘细胞的凋亡、抑制卵母细胞中CTSB和CTSS mRNA表达水平及酶活性，并提高卵母细胞的胚胎发育能力，但E-64影响卵母细胞发育的具体分子机制尚不清楚。 本实验利用双夹心ELISA检测不同来源的绵羊卵母细胞（成年绵羊和羔羊）在体外成熟过程中E-64对线粒体通路中的重要凋亡相关蛋白caspase-9、死亡受体通路中的重要凋亡相关蛋白caspase-8和细胞内凋亡执行蛋白caspase-3的表达量及酶活性的影响，同时利用RT-PCR技术检测线粒体膜重要基因Bcl-2和Bax的mRNA表达水平和死亡受体Fas及其配体FasL的mRNA表达水平，研究E-64影响绵羊卵母细胞发育的的作用机制。 结果表明:在成年绵羊卵母细胞体外成熟过程中，caspase-8、caspase-9和caspase-3的蛋白表达量呈先升高后降低的变化规律，其中caspase-9和caspase-3酶活性的变化规律与其蛋白表达量的变化规律相一致，而caspase-8的酶活性则呈逐渐升高的变化规律;在成熟液中添加E-64后，caspase-8、caspase-9和caspase-3的蛋白表达量未产生显著性变化(p＞0.05)，而caspase-8的酶活性在IVM24 h时极显著低于常规IVM24 h时的活性(p＜0.01)。常规IVM24h时caspase-9的活性显著高于IVM0 h时(p＜0.05)，而在E-64添加组，caspase-9的活性则与IVM0h时无显著性差异(p＞0.05)。在羔羊卵母细胞中，只有caspase-3在IVM24 h时蛋白表达量极显著高于成年羊IVM24 h时(p＜0.01)，而caspase-8和caspase-9蛋白表达量与酶活性均与成年羊无显著性差异(p＞0.05);在E-64添加组，IVM24 h时caspase-3的蛋白表达量及caspase-8、caspase-9的酶活性均低于常规组，而其他caspase的蛋白表达量和酶活性均与常规组无显著性差异(p＞0.05)。 对绵羊卵母细胞体外成熟过程中Bcl-2、Bax、Fas和FasL的mRNA表达水平的研究结果表明:Bcl-2 mRNA表达水平在IVM过程中呈先下降后上升的变化规律，其基因表达量在IVM8 h时极显著低于对照组(p＜0.01)，而成熟液中添加E-64使Bcl-2 mRNA表达水平在IVM过程内趋于稳定，且在IVM8 h时与对照组无显著性差异(p＞0.05);Bax mRNA的表达水平在IVM过程中也呈先降低后升高的变化规律，加入E-64后其在IVM24 h时的mNRA表达水平极显著低于常规IVM24 h的mRNA表达水平(p＜0.01);Fas mRNA在绵羊卵母细胞IVM过程中同样呈先下降后升高的变化规律，在IVM24h时其mRNA表达水平极显著高于对照组(p＜0.01)，在成熟液中添加E-64的IVM24 h的Fas mRNA表达水平极显著低于常规IVM24 h的mRNA表达水平(p＜0.01)，且与对照组无显著性差异(p＞0.05);FasLmRNA的表达水平在IVM过程中呈下降趋势，而E-64并未对成年羊卵母细胞中FasL mRNA表达水平产生显著性影响(p＞0.05)。在羔羊卵母细胞内，IVM0h时的羔羊卵母细胞中的Bcl-2 mRNA表达水平显著高于成年羊(p＜0.05)，然而经过体外成熟后Bcl-2mRNA表达水平下降到与成年羊的Bcl-2 mRNA表达水平无显著性差异(p＞0.05)，添加E-64也未产生显著性影响(p＞0.05);羔羊与成年羊卵母细胞中的Bax mRNA表达水平，在有无E-64添加组内，均无显著性(p＞0.05)差异;羔羊卵母细胞Fas mRNA表达水平在IVM24h时显著低于成年羊IVM24h的表达水平，但仍显著(p＜0.05)高于IVM0h时羔羊卵母细胞内的表达水平，在加入E-64后可降至与IVM0h时的Fas mRNA表达水平无显著性差异(p＞0.05);在体外成熟未开始以及体外成熟结束时，羔羊卵母细胞内的FasL mRNA的表达水平均极显著高于成年羊(p＜0.01)，成熟液中加入E-64的羔羊卵母细胞在IVM24h的FasL mRNA表达水平则降至与成年羊E-64添加组无显著性差异(p＞0.05)。 综上所述，E-64可下调成年羊卵母细胞体外成熟过程中的Bax、Fas mRNA表达水平及caspase-9和caspase-8的酶活性，而在羔羊卵母细胞中E-64下调了Fas、FasLmRNA表达水平和caspase-8的酶活性以及caspase-3的蛋白表达量。