论文部分内容阅读
组织蛋白酶是溶酶体蛋白酶中的一大家族，在蛋白降解、抗原提呈、细胞凋亡以及炎症反应中发挥重要作用。组织蛋白酶家族可以分为三类，分别为半胱氨酸蛋白酶（包括组织蛋白酶B和L）、丝氨酸蛋白酶及天冬氨酸蛋白酶（包括组织蛋白酶D）。组织蛋白酶B、D和L已在许多其他物种如哺乳动物、昆虫和贝类等发现，并进行了相关功能研究，但是(，)在鱼类中它们的研究却很少。本研究从半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)中克隆了组织蛋白酶B、D和L的同源物，分别命名为CsCatB、CsCatD和CsCatL，并分析了它们在不同条件下的表达变化情况以及酶活特性。
CsCatB编码322个氨基酸，与其他硬骨鱼及哺乳动物中的组织蛋白酶B有70-81.3％的全序列同源性。CsCatB具有典型组织蛋白酶的结构特征，包括有前肽区和半胱氨酸蛋白酶结构域，后者包含了四个高度保守的催化位点Q101，C107，H277，和N297。实时定量RT-PCR结果显示，CsCatB在多个组织中均有表达，在细菌和亚单位疫苗刺激后表达上调。重组表达的CsCatB表现出明显的蛋白酶活性，其最适温度为35℃，最适PH为5.5。当CsCatB的H277突变为谷氨酸后，其蛋白酶活性显著下降。
CsCatD编码396个氨基酸，与其他鱼类及哺乳动物中的组织蛋白酶D有67.6-88.4％的全序列同源性。CsCatD具有天冬氨酸内肽酶结构域，包含由两个天冬氨酸形成的催化位点。CsCatL编码336个氨基酸，与其他鱼类以及哺乳动物组织蛋白酶L有64.7-90.2％的同源性。CsCatLN端具有前肽抑制结构域，其下游是半胱氨酸蛋白酶结构域，含4个高度保守的催化位点，分别为Gln-133，Cys-139，His-279，和Asn-303。重组表达的CsCatL表现明显的蛋白酶活性。实时定量RT-PCR结果显示，CsCatD和CsCatL在多个组织中组成型表达，其表达量在心脏中最低，在肝脏中最高。在受到细菌、病毒以及亚单位疫苗刺激后，CsCatD和CsCatL在头肾及脾脏中的表达显著上调，并且这种诱导型表达是时间依赖性的。
上述结果显示，CsCatB和CsCatD具有蛋白酶活性，并且可能在机体对细菌及疫苗的免疫应答中发挥作用，CsCatD和CsCatL除可能具有上述免疫功能外，还可能参与机体对病毒的免疫应答。