论文部分内容阅读
真核生物DNA复制起始的控制机制确保了DNA在一个细胞周期中只能被复制一次，使DNA的合成被严格地控制在S期。对DNA复制起始的了解多来自对单细胞真核模式生物酿酒酵母Sacchromycescerevisiae的研究。酿酒酵母Noc3是一种DNA复制起始蛋白，参与了复制前复合物组分的募集。AD24蛋白是Noc3在人类的同源蛋白。香港科技大学梁纯博士实验室待发表的实验结果证明，AD24也参与了人类细胞的DNA复制的起始。本文通过酵母双杂交系统筛选人类卵巢上皮细胞cDNA文库中与AD24相互作用的蛋白，以寻找人类DNA复制起始的新调控蛋白。
在本文的酵母双杂交系统中，AD24基因编码序列与带有GALADNA结合域(BD)的pGBKT7质粒融合，构建成“诱饵”(bait)；人类卵巢上皮细胞cDNA文库则是cDNA序列与带有GALA转录激活域(AD)的pACI/2质粒融合而成的“猎物”(prey)的集合。通过多轮筛选，本人和合作实验室一起共获得25个与AD24相互作用的候选蛋白。
经过分析，本文选择BRD7蛋白作进一步研究。已知BRD7蛋白在Rb/E2F途径和ras/MEK/ERK信号途径中起负调节作用，抑制细胞从G1进入S期。Rb/E2F途径调控人类起始蛋白ORC1、Cdc6、Cdt1的表达；控制Cdc45与复制原点的结合；Rb蛋白可以与MCM7结合，E2F1和Rb可以和ORC结合，调节DNA的复制起始。BRD7拥有一个Bromo-domain(溴区)，以此与染色体结合，调节转录。因此BRD7可能就是E2F途径中转录调节这些复制起始蛋白的关键因子。
BRD7的溴区是细胞核组蛋白酰基转移酶的特征性结构，而酰基转移酶是除了磷酸酶以外的调节复制起始蛋白结合到DNA上的活性的重要酶类。本文实验初步显示BRD7与AD24等人类DNA复制起始蛋白在酵母细胞内存在相互作用，提示了BRD7可能通过调节这些DNA复制起始蛋白结合到染色体上的能力，而在人类DNA复制起始前复合物中扮演“组织者”的角色。
因此本文确定的BRD7与AD24存在物理性相互作用的事实，对BRD7参与细胞周期的调节是凭借转录调节还是直接参与DNA的复制起始提出了值得深入探讨的问题。