猪四倍体胚胎制作和4n-2N胚胎嵌合制作

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:syy1116
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
嵌合体是由不同遗传组成的细胞或者组织构成的嵌合生物个体。通过电融合制作小鼠四倍体胚胎与二倍体胚胎或者ES细胞嵌合后,四倍体胚胎来源的细胞贡献到胚外谱系中,二倍体细胞可以贡献到胚内和胚外谱系中,胚胎发育到期后能够得到完全来自二倍体胚胎或者ES的个体,这种方法称为四倍体补偿技术。因此,四倍体补偿技术可以绕过传统二倍体嵌合小鼠阶段,直接得到基因修饰的小鼠。除此之外,嵌合体的研究有助于胚胎细胞发育分化的研究和特殊物种基因保存,在动物育种、生产转基因动物研究、医学、产业化应用等众多领域也都具有广泛应用价值。   但关于猪嵌合体的研究鲜有报道,如何优化猪四倍体胚胎的制作方法,二倍体胚胎与四倍体胚胎嵌合最佳时期的确定,以及嵌合后不同倍性来源的细胞在嵌合囊胚中时如何分布等,都没有相关的报道,有待于研究。因此,为了探索猪的四倍体制作方法,四倍体嵌合体的制作方法,探索四倍体嵌合的生物学现象的观察,为建立与猪相关的疾病模型和转基因动物制作方法等奠定基础,本研究进行猪四倍体和四倍体嵌合的相关研究。   1制作猪四倍体胚胎体系的优化制作猪四倍体胚胎的最佳条件是90V,其融合率(82.33±6.13)、囊胚率(28.38±2.41)、胚胎死亡率(13.24±4.43)。   2.猪四倍体胚胎的发育时程和囊胚质量检测观察胚胎发育时程,发现四倍体在发育早期稍晚于二倍体胚胎,但是发生致密化和囊胚形成时间相近,并且四倍体与二倍体的发育率接近无显著差异,但4N囊胚细胞数(21.90±4.95)与2N囊胚细胞数(45.34±5.00)差异显著。   3.荧光原位杂交技术(FISH)检测四倍体的倍性用荧光原位杂交技术检测了胚胎的倍性,检测融合后胚胎发育到囊胚时融合后发育的囊胚中68.18%为四倍体,27.27%为二倍体,4.5%为2N/4N嵌合胚胎。对照组二倍体囊胚中95%为二倍体,5%为2N/4N嵌合胚胎。   4.2N-4N胚胎嵌合最佳聚合时期的探索4-Cell(4 N)<->4-Cell(2 N)聚合方式的囊胚率(74.36%)、囊胚细胞数(67.10±15.39)显著高于其它试验组。   5.2N-4N嵌合胚胎中不同倍性细胞分布特征4-Cell(4 N)<->4-Cell(2 N)聚合20对,获得12个囊胚,其中10个囊胚中2N胚胎细胞主要分布于ICM位置,少量分布于TE位置;另外2个囊胚中没有出现任何的GFP信号,应该是没有嵌合成功。反试验组中,聚合10对,发育得到5个囊胚,发现ICM外层和大部分的TE部位为4N胚胎来源细胞。   6.四倍体胚胎与IPS细胞嵌合的研究夹心聚合法进行嵌合时,IPS细胞团与4N胚胎进行嵌合成功,囊胚率为62.5%,囊胚中IPS嵌合率为45%。显微注射法制作嵌合胚胎,注射的IPS细胞成功嵌合到2N和4N囊胚中,2N囊胚中IPS嵌合率为21.54%,4N囊胚中IPS嵌合率为29.79%。   综上所述,本研究获得了猪四倍体制作优化体系,探索了四倍体与二倍体胚胎的嵌合和四倍体胚胎与IPS细胞的嵌合情况,为猪的四倍体胚胎和四倍体胚胎嵌合奠定了一定的基础。  
其他文献
  三元卟啉是新型的由三个吡咯环通过次甲基桥相连而成的具有14-π电子共轭的卟啉衍生物。目前文献报道的三元卟啉大多是含有硼原子的三元卟啉衍生物。而中心不含配位原子
会议
  天然醛香兰素存在于香子兰豆、马铃薯皮、安息香中,天然产物的金属配合物因兼具无机化合物和有机化合物的许多优良特性[1],而成为了当前化学、物理、材料科学与生命科学研
会议
  由类似八面体组成的实心微球及由纳米棒组成的空心微球状的β-In2S3,是通过简单的一步水热法制备得到的.根据表面光电压光谱来测定硫化铟的表面光电压性能.制备出的硫化
  本文利用水热合成反应,以对羧基苯基膦酸为有机膦酸配体,成功合成了一个具有二维超分子结构的金属膦酸盐[Cu(2,2'-bpy)(O2CC6H4PO3H)(H2O)]。利用 X-射线单晶衍射、IR 光
会议
  近年来,随着环境保护意识的增强及对能源需求的增加,利用太阳能分解水制取氢燃料引起了人们广泛的关注。氢气是一种易于可再生的清洁能源,且不会产生温室效应。光催化分解水
会议
  富勒烯碳笼内部可包入多种金属原子或团簇,形成一种新的杂化分子,被称为内包金属富勒烯(Fig.1).由于金属的存在及对碳笼的影响,内包金属富勒烯的结构复杂、性质奇特,具有广阔
  通过选择一系列不同尺寸和不同官能团的配体,我们成功合成了系列柱撑型微孔材料。这些化合物不仅具有对氮气和二氧化碳气体的选择性吸附,同时展现出对水和酸碱溶液有一定的
  (1)用于电子通讯光放大器的有机铒配合物[1]。把全氟化铒配合物掺杂在全氟化的主体分子中,实现了对铒离子的有效耦合,量子效率达到7%。在硅基底上制备了波导器件,用3 mW蓝
会议
期刊
  d10电子构型的过渡金属通过自组装形成的金属配位聚合物由于具有优良的荧光性能和廉价易得的特点成为具有潜在应用的发光材料,引起了人们的广泛关注.我们课题组选择Cd(NO
会议