【摘 要】
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Tet-off/Tet-on四环素诱导表达系统是比较成熟的真核生物基因诱导表达系统之一,具有高效、无毒、严密开/关功能的特点,已被成功应用于细胞和转基因鼠中基因诱导表达的研究.SV
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Tet-off/Tet-on四环素诱导表达系统是比较成熟的真核生物基因诱导表达系统之一,具有高效、无毒、严密开/关功能的特点,已被成功应用于细胞和转基因鼠中基因诱导表达的研究.SV40 T是一种病毒癌蛋白,其与肿瘤抑制蛋白p53和Rb结合,并使之失活,消除了它们抑制细胞生长的功能,增加了细胞进入G1-S期的数量,使细胞分裂加速,形成肿瘤.该研究引入Tet-on四环素基因诱导表达系统,稳定筛选获得了表达Tet-on系统调节元件rtTA的阳性细胞CHO-pTet-on,再通过稳定筛选又成功得到导入其反应元件的双阳性细胞CHO-pTet-on-pTRE2-SV40T-Hyg,经Dox诱导表达了目的基因SV40T,建立了Tet-on基因诱导表达系统的细胞诱导表达研究平台.利用经细胞诱导表达证实的重组质粒,采用显微注射的方法,成功获得了Tet-on双阳性转基因小鼠,并且三个模型中的pTet-on、pTRE2-SV40T基因均可通过生殖器稳定遗传,从而建立了Tet-on基因诱导表达系统的转基因小鼠诱导表达的研究平台.利用Founder 123＃转基因小鼠成功建立了Tet-on系统诱导表达SV40 T转基因小鼠脑成神经管细胞瘤模型.从而我们可以定时、定量地控制致癌基因SV40 T的表达,为探讨SV40 T在脑成神经管细胞瘤形成中的作用创造了条件,为研究SV40 T与其它相关基因的相互作用提供了前提和基础.
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