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干扰素-α（Interferon-α，IFN-α）是细胞因子家族成员之一，是一种具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等多种生物学功能的糖蛋白，目前仍是治疗慢性髓细胞白血病（Chronic myeloid leukemia，CML）的首选药物之一。越来越多的临床治疗经验表明，联合生物反应调节剂、细胞毒药物或抗病毒药物可发掘干扰素的治疗潜能、减轻其副作用，但机制未明。高三尖杉酯碱（Homoharringtonine，HHT）是一种从常绿植物中提取的生物碱，最先由中国学者发现其具有抗急性白血病活性。90年代中期M.D.Anderson癌症中心的研究者将小剂量HHT用于CML患者，获得一定的临床疗效。抑制蛋白质合成被认为是HHT抗白血病活性中最为重要的机制，近年来的研究表明HHT还只有诱导CML细胞凋亡的功能。本研究以CML急变来源的细胞株K562细胞作为研究对象，通过观察IFN-α和HHT联合应用对K562细胞的作用，并研究其可能的作用机理，为CML的临床治疗提供理论依据并拓宽思路。 本实验应用MTT比色法研究IFN-α、HHT以及两药联用对K562细胞的生长抑制作用。结果表明，单用1000IU/ml、5000IU/ml、10000IU/ml和20000IU/ml IFN-α作用K562细胞3天可抑制细胞生长，并随药物浓度的增加抑制作用增强，但统计学无相关性（r=0.805，p=0.195）。5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml和40ng/ml HHT均能明显抑制K562细胞的生长，抑制率分别为14.48％、23.79％、39.16％和69.48％，有非常显著的量效关系（r=0.994，p=0.001），IC50为27.35ng/ml。各浓度HHT与5000IU/ml IFN-α联合作用K562细胞3天，细胞的抑制率分别为19.57％、43.82％、65.27％和73.77％，生长抑制作用比单用相应浓度HHT时明显增强，差异有非常显著的统计学意义 4fSlrtweEpeMWWrtwert （PHHT。－0．008，pHHTIO、pHHT。0＄lIpHHT40均小T－0，001），HHT 的 IC。。卜降到18．72ng／ml，说明两药可协同抑制 K562细胞的生LC。5000lU／ml IFN－。4 20ng／ml HHT联合作川K562细胞072小时，随作川时间的延K，抑制效果越明显，Y显种止相关 （r＝0．966，厂＝0．034）。 为进一步探讨钓物与诱导细胞凋亡之间的关系，我们采川占姆萨．瑞氏染色对细胞形态结构进行观察，发现5000lU／ml IFN＊。或40ng／ml HHT单独作川 3大的K562细胞，均术出现明显的凋亡，而两者联川的细胞片现典羽的凋亡形态学改变。我们试图川DNA凝胶电泳来进一步说明药物联用的诱导细胞凋亡作川，但在延长作川时间和／或增加 HHT联用剂量的情况卜，屯泳图均米见明显的 DNA梯形条带、川 PI．Annexin V’‘’“双染色，流式细胞仪检测显示，经40ng／ml HHT作川 3大的 K562细胞以坏死为主，凋亡率／坏死率为8．47％／20．12％；而联川 5000IU／ml IFN－口后作川K562细胞3大，凋亡率收｛死率为31．67％／17刀4％，细胞以凋亡为主。结果还显示细胞的凋亡率随着联川的HHT浓度的增加而升高。联合50001UM IF卜。与20ng／M＊＊T作川细胞24、48和刀小时，凋亡率分别为 9．67O、26．92O＄11 70．89O，凋亡率随作川时间的延K而升高。 本研究应川 Krupp改良的荧光素标记的端粒重复扩增方法（TRAP）检测 K562细胞端粒酶活性，RT－PCR方法检测 K562细胞中人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA的表达水平，探讨与药物诱导的细胞凋亡之间的关系。结果表明单川10ng／ml、20nghl和40ng／ml HHT或分别联川 5000IU／ml IFN－a作川K562细胞24小时，能抑制细胞的端粒酶活性，并且联川药物组的抑制作川更强。同时提取细胞的RNA，RT－PCR产物电泳后示K562细胞 hTERT mRNA的表达水平受到不同程度的抑制，与联川的 HHT浓度Y量效关系，抑制作川比单用 HHT更明显。5000IU／mllFN－o与20ng／nil HHT联合作川K562细胞，IITERT IRNA表达水平随作川时间的延K不断卜降。冈此我们认为 IFN－O联合 HHT诱导细胞凋亡可能与h调 hTERT mRNA的表达水平，抑制端粒酶活性有犬，这可能是两者联合治疗 C ML有效的机制之一。 综匠：所述，我们认为①单川HHT、IFN－Q对K562细胞均有个Li抑制作川，HHT对K562细胞的抑制作川存在挝效关系；②5000IU／1ill IFN－（。分别联合 5－40fig／111！HHT对K562细胞的抑制作川比单川相应浓度HHT时增强，几协同仆川，‘。联川的HNT浓度存在挝效犬系：单川H＊T时IC。；；为27．35ng／ml，联川50001L厂。川IFN－u ）厂IC。；；阴为18．72ng八刀1；50001U／ml IFN－。‘J ZOng八nl HNTllX川对K562细胞的抑制什川仟A川＋效大系；③！PN－。。’J HHT收合w川对K 5 62细胞的十K抑制’广SH细胞凋人－／1－义；④IFN－。。’jllHT仰川抑制K562细胞的端料酶恬什；问时］－训1。T【＊T；；；！ZN＊人丛．‘，’时效、汐效人系：。n厂。卜－。。收什1卫1！”晒＃细胞M广＼、侣’J卜u纠＊胞1；＊H｛r；；讯N八的人止水个．抑川仇什卜W恬川－八(，这山。。l能壮仙八叭、川VC卜11。的村＊』卜二 帅八W午例川l1‘广仙