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目的:探究量子点(QDs)连接适配子(QD-Apt)靶向EGFRv III胶质瘤成像的方法与可行性。方法:1.QD-Apt的合成、物理学特征测定及安全性研究1)QD-Apt的合成及物理学特征测定:生物素修饰的适配子(A32)与链霉亲和素修饰的量子点(SA-QDs)通过生物素-链霉亲和素链接将两者结合形成QD-Apt。Zetasizer Nano ZS型纳米粒度分析仪测定QD-Apt粒径,荧光分光光度计测定QD-Apt及QDs的吸收光谱和发射光谱。琼脂糖凝胶电泳初步验证适配子与量子点的连接。2)安全性研究:体外采用CCK-8法检测QD-Apt对HUVEC、U87和U87-EGFRv III细胞活力的影响。体内尾静脉注射QD-Apt后,不同时间点测量裸鼠体重。HE染色观察裸鼠各器官组织的病理变化。2.QD-Apt在体外的靶向荧光标记1)EGFRv III在细胞株中的表达:逆转录PCR(RT-PCR)、western blot和细胞免疫荧光方法检测HUVEC、U87、U87-EGFRv III细胞ERFRv III的表达。2)QD-Apt靶向胶质瘤细胞株的研究:QD-Apt标记HUVEC、U87、U87-EGFRv III细胞,并在激光共聚焦下观察荧光强度。流式细胞术检测QD-Apt对HUVEC、U87、U87-EGFRv III细胞的标记率。3.QD-Apt在裸鼠体内成像及组织分布:建立裸鼠颅内胶质瘤模型并用MRI检测肿瘤生长情况。4周后,尾静脉注射QD-Apt及QDs,6小时后进行活体成像。并取瘤组织及正常脑组织行冰冻切片并在激光共聚焦下观察;分光光度计测定各组织器官的荧光强度。结果:1.成功构建QD-Apt纳米探针,QD-Apt及QDs的粒径均为20nm左右,QDs与A32连接后,其最大发射光谱仍为605±5nm,吸收光谱波峰仍为330nm。琼脂糖凝胶电泳结果表明,适配子与量子点连接成功。体内外的安全性研究均证实QD-Apt无明显毒性。2.EGFRv III在U87-EGFRv III细胞中为阳性表达,而在U87、HUVEC中均为阴性表达。QD-Apt可特异性的结合U87-EGFRv III胶质瘤细胞株并且标记率高达81.53%。3.活体荧光成像显示,QD-Apt可以透过血脑屏障并通过特异性结合EGFRv III而选择性地聚集在肿瘤组织中。与正常脑组织相比,肿瘤组织中具有很强的荧光信号,可以清晰地显示出肿瘤的边界。QD-Apt主要聚集在EGFRv III(+)的肿瘤组织、肝脏和肾脏,而在瘤旁、正常脑组织、脾、肺和心等较少。结论:QD-Apt可以通过特异性结合EGFRv III靶向胶质瘤荧光成像。