论文部分内容阅读
长期以来，饲用抗生素的使用为畜牧业的发展做出重大贡献的同时也带来了抗药性、毒副作用和药物残留等诸多负面影响，安全、高效的绿色饲料添加剂代替抗生素的使用已成为畜牧业发展的重要方向。本研究首先对不同来源的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和乳酸杆菌进行生物学特性研究，并通过对大肠杆菌(K88)的体外抑菌试验确定益生菌的最佳复合配比，得到高效的复合益生菌制剂；进一步试验研究益生菌制剂对断奶仔猪生长性能、肠道内容物的影响及其对脂多糖刺激仔猪肠道吸收与屏障功能的影响。本研究主要包括以下五部分内容：试验一：益生菌株的生物学特性比较分析分别从五种枯草芽孢杆菌制剂、六种地衣芽孢杆菌制剂和三种乳酸杆菌制剂中筛选出相应的菌株，然后进行耐高温、耐酸、耐胆盐及抑菌性试验，综合比较分析筛选最佳菌株，并进行发酵生产益生菌制剂。研究发现，枯草芽孢杆菌中ZJ2菌株具有较强的耐高温特性，ZJ4菌株具有较强的耐酸性及抑菌性，耐胆盐特性除ZJ3菌株较差外其他菌株之间差异不大；地衣芽孢杆菌中D2菌株具有较强的耐高温和耐胆盐特性，耐酸特性D3、D2菌株较好，抑菌性D4菌株较好，D2菌株较差；乳酸杆菌R2菌株具有较强的耐酸性、耐胆盐性及抑菌性。研究发现，枯草芽孢杆菌ZJ4、地衣芽孢杆菌D2和乳酸杆菌R2生物学特性相对较强，可以作为优异菌株进行后续发酵试验。试验二：不同组合的益生菌制剂对大肠杆菌K88体外抑菌试验研究研究枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌不同比例对大肠杆菌(K88)的抑菌效果，获得最佳配比后再与乳酸杆菌和酵母菌进行组合，通过测定大肠杆菌(K88)的数量来判断益生菌对大肠杆菌抑制作用的强弱。结果表明，枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌按1:1的比例混合及复合芽孢杆菌、乳酸杆菌、酵母菌按2:3:1的比例混合时，对大肠杆菌(K88)具有最强的抑菌效果,进而确定出益生菌的最佳复合配比。试验三：不同类型益生菌制剂对断奶仔猪生长性能及血液生化指标的影响试验选取28日龄左右的杜×长×大三元杂交仔猪40头，随机分为5组，每组4个重复，每个重复2头。5个处理分别为对照组（基础日粮）、试验Ⅰ组（芽孢杆菌）、试验Ⅱ组（乳酸杆菌）、试验Ⅲ组（复合益生素）、试验Ⅳ组（硫酸抗敌素）。进行为期30d的饲养试验，测定仔猪生长性能和血液生化指标。结果显示：①芽孢杆菌、乳酸杆菌和复合益生菌对仔猪日增重无显著影响（P>0.05），芽孢杆菌和复合益生菌均能显著降低仔猪料重比（P<0.05），乳酸杆菌对料重比无显著影响（P>0.05），三者均能显著降低仔猪腹泻率（P<0.05）。②乳酸杆菌和复合益生菌均能有效提高断奶仔猪血糖含量（P<0.05），芽孢杆菌无显著影响（P>0.05），三种益生菌均有提高血清总蛋白含量升高（P>0.05），降低血清尿素氮含量（P>0.05）的趋势。结果表明，三种不同类型的益生菌制剂均提高了饲料转化率，有效降低了仔猪腹泻率。试验四：不同类型益生菌制剂对断奶仔猪肠道微生物区系、pH值和挥发性盐基氮的影响试验研究了芽孢杆菌、乳酸杆菌对断奶仔猪肠道微生物区系、pH值和挥发性盐基氮（VBN）的影响。试验选取28日龄左右的杜×长×大三元杂交仔猪24头，随机分为3组，每组4个重复，每个重复2头。3个处理分别为对照组（基础日粮）、试验Ⅰ组（芽孢杆菌）、试验Ⅱ组（乳酸杆菌），进行为期30d的饲养试验。试验结束后收集盲肠和结肠内容物用于微生物、pH和挥发性盐基氮的测定。结果表明，芽孢杆菌和乳酸杆菌均可提高仔猪盲肠与结肠中乳酸杆菌相对数量，降低盲肠内容物pH值，提高结肠内容物pH及降低肠道内VBN含量。试验五：不同类型益生菌制剂对脂多糖刺激仔猪肠道吸收和屏障功能的影响试验选取28日龄左右的杜×长×大三元杂交仔猪32头，随机分为4组，每组4个重复，每个重复2头猪。4个处理分别为对照组（基础饲粮）、LPS组（基础饲粮）、试验Ⅰ组（基础饲粮+芽孢杆菌）、试验Ⅱ组（基础饲粮+乳酸杆菌），进行为期30d的饲养试验。试验期第30天LPS组和试验组注射LPS，剂量为100μg/kg BW，对照组注射相同剂量的生理盐水，注射2h后，给所有仔猪灌服D-木糖溶液（0.1g/Kg·BW），注射LPS3h后采血。注射LPS6h后屠宰，取小肠黏膜组织待测。结果显示：①与对照组相比，LPS组空肠绒毛高度/隐窝深度比值显著降低（P<0.05），十二指肠和空肠绒毛宽度和绒毛表面积均显著降低（P<0.05）；空肠乳糖酶活性显著降低（P<0.05），回肠蔗糖酶活性升高（P>0.05）；十二指肠和空肠黏膜碱性磷酸酶活性显著降低（P<0.05）；血浆D-木糖含量降低了33.3%（P<0.05）；血浆DAO活性显著升高（P<0.05）。②与LPS组相比，芽孢组和乳酸组空肠绒毛高度/隐窝深度比值显著升高，乳酸组十二指肠和芽孢组空肠绒毛宽度和绒毛表面积均显著升高；芽孢组和乳酸组回肠蔗糖酶活性显著降低（P<0.05），空肠乳糖酶活性显著升高（P<0.05），乳酸组回肠乳糖酶活性显著升高（P<0.05）；芽孢组和乳酸组对小肠黏膜碱性磷酸酶活性无显著影响（P>0.05）；芽孢组和乳酸组血浆D-木糖含量分别升高了15.6%（P>0.05）和18.8%（P>0.05）；芽孢组空肠和回肠DAO含量分别降低了27.1%（P<0.05）和38.0%（P<0.05），乳酸组空肠组和回肠DAO含量分别降低了33.3%（P<0.05）和17.0%（P>0.05）。结果表明，饲料中添加芽孢杆菌制剂和乳酸杆菌制剂缓解了LPS刺激导致的肠道黏膜损伤，一定程度上保护了肠黏膜的完整性。