高氧对新生大鼠脑内谷氨酸及其转运体的影响

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目的研究高氧后新生大鼠脑组织内谷氨酸及其转运体的变化,探讨高氧性脑损伤中谷氨酸的作用机制。方法将新生大鼠分为高氧实验组和空气对照组,高氧组将日龄6d新生大鼠置于浓度为80%高氧下持续暴露24h,建立日龄7d新生大鼠未成熟脑高氧模型,对照组将同日龄新生大鼠置于正常空气中饲养。两组新生大鼠均于第7d断头取脑组织,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑组织内谷氨酸(Glu)及γ-氨基丁酸(GABA)蛋白含量;应用Western Blot法检测高亲和力谷氨酸转运体EAAT1、EAAT2、EAAT3,葡萄糖转运体GLUT1、GLUT3及低亲和力谷氨酸转运体VGLUT1、VGLUT2的蛋白表达情况;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测新生大鼠脑内高亲和力谷氨酸转运体EAAT1与葡萄糖转运体GLUT1 mRNA表达变化。采用SPSS 19.0统计软件对数据进行统计学分析并绘制相关统计图表,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,两组间比较采用两独立样本t检验,偏态分布资料用中位数和四分位数[M(P25,P75)]表示,两样本的组间比较采用Mann-Whitney U检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果1.ELISA检测结果发现高氧组日龄7d新生大鼠脑组织内谷氨酸较对照组明显升高[27.80(22.68,42.05)vs 17.46(14.75,20.16)]mmol/L,两组相比较差异有统计学意义(Z=-2.205,P=0.032),且高氧组日龄7d新生大鼠脑组织内Glu/GABA比值为2.69(2.43,3.08),对照组日龄7d新生大鼠脑组织内Glu/GABA比值为1.06(0.57,2.03),两组比较差异具有统计学意义(Z=-2.205,P=0.032)。2.Western Blot检测结果发现高氧组日龄7d新生大鼠脑组织内谷氨酸转运体EAAT2、EAAT3、GLUT1和VGLUT2的蛋白表达较对照组明显降低,高氧组和对照组比较差异有统计学意义(EAAT2:t=5.206,P=0.008;EAAT3:t=2.785,P=0.024;GLUT1:t=2.89,P=0.020;VGLUT1:t=2.611,P=0.031),而高氧组日龄7d新生大鼠脑组织内谷氨酸转运体EAAT1、GLUT3和VGLUT1的蛋白表达与对照组相比有所降低,但两组相比较差异均无统计学意义(P>0.05)。3.RT-PCT检测结果发现高氧组日龄7d新生大鼠脑组织内高亲和力谷氨酸转运体EAAT1 mRNA与对照组相比表达升高(2.15±0.51 vs 1.31±0.20),但两组比较差异无统计学意义(P=0.142);高氧组日龄7d新生大鼠脑组织内葡萄糖转运体GLUT1 mRNA降低(0.63±0.12 vs 1.09±0.15),高氧组和对照组比较差异有统计学意义(t=2.443,P=0.025),与Western Blot结果具有一致性,说明高氧在基因水平上降低了葡萄糖转运体GLUT1的表达。结论高氧导致脑组织内谷氨酸水平增加,谷氨酸转运体EAAT2、EAAT3、GLUT1和VGLUT2的蛋白表达下降,脑组织内Glu/GABA的比值增高,打破了脑组织内兴奋性氨基酸与抑制性氨基酸的平衡关系,可能是高氧造成脑损伤的重要原因之一。
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