人resistin基因克隆和蛋白纯化

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2001年初Stappen<[1]>首次报告了连接2型糖尿病和肥胖症与胰岛素抵抗之间的信号分子,它是一个脂肪细胞分泌的蛋白激素,命名为resistin(resistance to insulin,暂译为抵抗素).该文在国内率先克隆人resistin基因,并纯化了resistin蛋白,旨在:①为进一步开展对resistin研究打下实验基础②了解中国人resistin基因编码区是否存在多态性.该文研究从一名2型糖尿病患者腹壁皮下脂肪组织中提取总mRNA,用RT-PCR扩增出resistin基因cDNA并测序,然后cDNA亚克隆进入T载体,重组T载体经PCR和测序鉴定后,用EcoRI和KpnI内切酶从重组T载体切下目的基因片段,用相同酶切原核表达载体pGENKS,然后目的片段与原核表达载体通过T4DNA连接酶进行定向连接,重组表达质粒用酶切鉴定.
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