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目的:1、评估外周血循环游离核苷酸甲基化的septin 9基因(mSEPT9)在结直肠癌诊断方面的应用价值。2、探讨外周血mSEPT9在评价结直肠癌治疗疗效和复发监测方面的潜力。3、研究SEPT9基因在结直肠癌及腺瘤组织中的甲基化水平。4、观察SEPT9蛋白在mSEPT9-阳性及mSEPT9-阴性肿瘤中的表达是否存在差异。方法:1、本研究共收集血浆样本482例,其中结直肠癌98例,腺瘤101例,炎症肠病30例,健康对照组253例;组织样本86例,其中结直肠癌56例,腺瘤30例,以上样本均通过亚硫酸盐转化及实时荧光探针PCR(qPCR)技术检测mSEPT9水平。2、对60例结直肠肿瘤组织切片并进行免疫组织化学染色(mSEPT9-阳性肿瘤组织切片30例;mSEPT9-阴性肿瘤组织切片30例)以检测SEPT9蛋白在组织中的表达情况。3、收集mSEPT9阳性结直肠癌患者术前及术后的外周血样本进行血清CEA和mSEPT9检测,根据手术前后CEA浓度及mSEPT9状态的变化评价手术治疗效果。血清CEA浓度通过电-化学发光法测定。4、对术前mSEPT9-阳性患者随访3年,第1年每3个月进行一次复查,第2、3年每6个月进行一次复查,检查内容包括结肠镜、胸部和腹部CT或磁共振、血液常规、血清CEA和mSEPT9。结果:1、结直肠癌患者术前外周血mSEPT9检测敏感性为61.2%(95%CI 51.3%-70.3%),特异性为93.7%(95%CI 91.1%-95.6%);mSEPT9在结直肠患者外周循环血液中的阳性率(60/98,61.2%)明显高于腺瘤病人(8/101,7.9%)、炎症病人(2/30,6.7%)及健康对照组,4/253,1.6%),差异有统计学意义(P值均<0.001)。2、结直肠癌组织中SEPT9基因甲基化的水平(43/56,76.8%)明显高于腺瘤组织(4/30,13.3%),差异有统计学意义(P<0.001);组织mSEPT9检测敏感性为76.8%(64.2%-85.9%),特异性为86.7%(70.3%-94.7%)。3、外周血循环游离核苷酸SEPT9甲基化水平与结直肠癌的病灶大小、组织学分级及病理类型相关(P<0.05),差异有统计学意义;而与患者的年龄、性别、组织学分型、发病部位、临床分期、脉管内瘤栓、神经侵犯无关,差异均无统计学意义(P>0.05);组织SEPT9甲基化水平仅与组织学分级有关,差异有统计学意义(P=0.037)。4、术前血浆mSEPT9阳性患者术后mSEPT9的阴性转变及CEA的降低反映了结直肠癌患者的手术良好的治疗效果。但术后(7-14天)血浆mSEPT9持续阳性及CEA的升高与复发或转移高度相关(P<0.001)。5、SEPT9蛋白表达水平在mSEPT9阳性组织中表达降低,在mSEPT9阴性组织中相对较高。结论:我们的结果表明,外周血游离核酸mSEPT9荧光探针PCR检测作为一种非侵入性方法,对结直肠癌的诊断有较高的敏感度和特异性,同时,我们也揭示了它可做为结直肠癌术后疗效观察及随访监测的敏感分子标志物。本课题研究结果为进一步的多中心临床研究及临床应用推广提供了前期数据。