谷胱甘肽转移酶的分离纯化、荧光光谱以及外源物质对其活性影响研究

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谷胱甘肽转移酶(GST)是生物体中广泛存在的蛋白酶,其功能是催化谷胱甘肽(GSH)亲核性的巯基与亲电性底物结合,从而降低亲电性物质对生物机体的伤害。从二十世纪七十年代发现谷胱甘肽转移酶至今,对它的研究不断深入,其在生物体中的功能也不断被揭示,本文主要研究了谷胱甘肽转移酶的光谱学性质、分析方法以及外化学物质对昆虫的谷胱甘肽转移酶的影响。全文共分五章,主要内容如下:第一章系统综述了谷胱甘肽转移酶研究进展,包括谷胱甘肽转移酶的分类、解毒机理、结构、纯化、与昆虫抗药性的关系。 第二章通过亲核层析纯化分离了谷胱甘肽转移酶,分离后得到电泳纯产品,考察了谷胱甘肽转移酶的荧光光谱学性质以及不同酸碱条件下荧光变化;通过荧光性氨基酸荧光移动,揭示了其所处的微环境;初步研究了在不同物理处理条件酶活性的变化。 第三章研究了谷胱甘肽转移酶活性测定方法,传统方法是测定催化产物的吸光度,利用吸光度的变化来定义酶活性。本文尝试用电化学方法,机理与光度法相似,但是以氯离子浓度变化来表示酶活性,氯离子浓度用氯离子选择性电极进行测定。 第四章通过在食物中添加相关化学药剂,研究了植物次生物质烟碱、柠檬酸烟碱、芸香苷对斜纹夜蛾体内的谷胱甘肽转移酶活性的影响,并测定了相关处理的斜纹夜蛾体内谷胱甘肽转移酶的普通荧光、同步荧光光谱,结果表明不同次生物质对谷胱甘肽转移酶的影响不一样,有的具有诱导作用,有的具有抑制作用,在分子行为上表现为色氨酸残基微环境极性变化。 第五章烟碱是烟草中含量较为丰富的次生代谢物,吸食烟草目的是获取烟碱,本文从光谱学角度研究了烟碱对牛血清蛋白的影响,烟碱能够猝灭牛血清蛋白荧光,通过荧光滴定法得到猝灭机理,猝灭常数。
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