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目的:建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型,考察药对知母-黄柏及其有效成分芒果苷对胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱的改善作用,并探讨其对AMPK信号通路上游APN转导AMPK信号通路关键因子APN、AdipoR2、APPL1、AMPK以及AMPK信号通路下游胰岛素信号转导通路关键因子IRS-1、AKT、GLUT4的干预作用,以阐明药对知母-黄柏及芒果苷改善HepG2细胞胰岛素抵抗状态的作用机制,为开发综合治疗2型糖尿病等代谢性疾病的药物提供实验依据。方法:1.采用不同浓度油酸、棕榈酸及二者混合诱导HepG2细胞24h产生胰岛素抵抗,检测其细胞活力及糖耗变化,并采用油红0染色法观察细胞状态以检验模型是否诱导成功。2.采用MTT法检测药对知母-黄柏及芒果苷对HepG2细胞的活力及毒性影响,筛选无毒性的给药浓度范围,并进行药对知母-黄柏及芒果苷的药效实验。采用2mM油酸与1mM棕榈酸联合诱导HepG2细胞24h建立胰岛素抵抗模型,将其分为模型组、阳性对照组(二甲双胍)、知柏药对给药组(384、192、96 mg.L-1)、芒果苷给药组(500、250、125 μM)及溶媒组(0.2%DMSO),另设正常对照组,各组给药24h后收集培养液上清及细胞样品,检测其糖耗、甘油三酯、胆固醇变化,考察其降糖降脂药效。3.知柏药对及芒果苷作用于胰岛素抵抗HepG2细胞24h后,收集细胞样品,提取总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测APPL1、AdipoR2、APN、AMPK、IRS1、AKT、GLUT4因子的mRNA表达。4.知柏药对及芒果苷作用于胰岛素抵抗HepG2细胞24h后,收集细胞样品,提取总蛋白,采用蛋白免疫印迹法检测p-AMPK和AMPK蛋白的表达。结果:1.与正常组相比,不同浓度油酸、棕榈酸及二者混合均能降低HepG2细胞葡萄糖消耗量,其中以油酸与棕榈酸二者混合造模效果较佳,尤其以1mM棕榈酸与2mM油酸联合诱导造模效果最佳(P<0.01),且对细胞活性未造成影响,而棕榈酸单用造模表现出明显的细胞毒性;油红0染色后在镜下亦能观察到1mM棕榈酸与2mM油酸联合诱导的HepG2-IR细胞内有大量油滴沉积并被染红,提示HepG2细胞胰岛素抵抗模型建立成功。2.不同浓度知柏药对及芒果苷作用于胰岛素抵抗HepG2细胞24h后,与模型组相比,知柏药对及芒果苷均能显著增加HepG2细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗(P<0.01),并能显著降低其甘油三酯及胆固醇含量(P<0.05);其中当药对知母-黄柏给药浓度为192 mg·L-1时改善效果最佳,降糖降脂作用与二甲双胍相当;芒果苷给药浓度为125 μM时降脂效果较佳,其降甘油三酯作用较优于二甲双胍,而降胆固醇作用与二甲双胍相当。3.不同浓度知柏药对及芒果苷作用于胰岛素抵抗HepG2细胞24h后,与模型组相比,知柏药对192 mg.L-1剂量组及芒果苷125 μ M剂量组均能显著上调AMPK信号通路上游APN转导AMPK信号通路关键因子APN、AdipoR2、APPL1、AMPK的mRNA表达(P<0.05),同时能显著上调AMPK信号通路下游胰岛素信号转导通路关键因子IRS-1、AKT、GLUT4 的 mRNA 表达(P<0.05)。4.不同浓度知柏药对及芒果苷作用于胰岛素抵抗HepG2细胞24h后,与模型组相比,知柏药对及芒果苷各剂量组均能显著增加AMPK信号通路关键因子AMPK磷酸化蛋白的表达水平(P<0.05),其中知柏药对192 mg·L-1剂量组及芒果苷125 μM剂量组效果较佳。结论:本研究表明药对知母-黄柏及芒果苷对胰岛素抵抗HepG2细胞糖脂代谢紊乱具有改善作用,其作用机理为通过上调AMPK信号通路上游APN转导AMPK信号通路关键因子APN、AdipoR2、APPL1的mRNA表达,以此激活AMPK信号通路,增加AMPK的磷酸化,促进AMPK蛋白的表达,从而进一步上调AMPK信号通路下游胰岛素信号转导通路关键因子IRS-1、AKT、GLUT4的mRNA表达,促进糖脂代谢,降低体内的糖脂水平,最终改善胰岛素抵抗。