【摘 要】
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目的:实验通过建立大鼠原位肺移植模型,利用实验动物学及分子生物学的技术,阐明大鼠肺移植供肺灌注、冷缺血、再灌注后自噬水平变化,为调控自噬水平,减轻肺移植缺血再灌注损
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目的:实验通过建立大鼠原位肺移植模型,利用实验动物学及分子生物学的技术,阐明大鼠肺移植供肺灌注、冷缺血、再灌注后自噬水平变化,为调控自噬水平,减轻肺移植缺血再灌注损伤提供理论依据。方法:1、分组并建立模型:SPF级雄性SD大鼠,共60只,质量300~350g。随机挑选12只作单纯灌注冷缺血处理,其中6只作为单纯灌注冷缺血0h对照,另外6只作单纯灌注冷缺血后保存6h处理;其余48只分为供、受体,受体略大于供体,供、受体间质量差不超过20g,进行左肺移植手术。本实验共分五组:(1)CON组即灌注后,冷缺血保存0h组;(2)ISC6组即灌注后,冷缺血保存6h组;(3)REP2组即灌注后,先冷缺血保存6h,移植后再灌注2h组;(4)REP6组即灌注后,先冷缺血保存6h,移植后再灌注6h组;(5)REP12组即灌注后,先冷缺血保存6h,移植后再灌注12h组。其中CON,ISC6组各6例,REP2,REP6,REP12组各移植6对大鼠。2、分子生物学检测:免疫荧光双染LC3,LAMP-2,检测自噬流,Western blot检测LC3-II/LC3-I。结果:1、成功建立了一种经过改良了肺移植技术的大鼠原位左肺移植模型;2、通过免疫荧光双染LC3,LAMP-2,发现:CON组自噬流最低,ISC6组自噬流稍升高,REP2,REP6组自噬流显著升高,其中REP6组自噬流最高,REP12组自噬流降低。3、通过Western blot检测LC3蛋白表达发现:CON组LC3蛋白表达最低,ISC6组LC3蛋白表达稍升高,REP2,REP6组LC3蛋白表达显著升高,其中REP6组LC3蛋白表达最高,REP12组LC3蛋白表达降低。结论:大鼠肺移植供肺灌注、冷缺血6h后自噬水平开始增高,再灌注2h的自噬水平明显增高,再灌注6h达到高峰,再灌注12h后自噬减轻。
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