【摘 要】
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猕猴桃软腐病主要发生在果实采后贮藏期及销售货架期,发病果实迅速软化腐烂,失去食用价值,给猕猴桃产业造成严重的经济损失。猕猴桃软腐病的防治虽还是以化学防治为主,但人们也逐渐意识到化学药剂的危害,从而寻找替代的防治方案。一直以来,生物防治因其高防治效率以及低环境污染在果蔬病害防治上得到广泛研究及应用。本课题探究了生防细菌枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）菌株BS-1对猕猴桃软腐病病原菌
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猕猴桃软腐病主要发生在果实采后贮藏期及销售货架期,发病果实迅速软化腐烂,失去食用价值,给猕猴桃产业造成严重的经济损失。猕猴桃软腐病的防治虽还是以化学防治为主,但人们也逐渐意识到化学药剂的危害,从而寻找替代的防治方案。一直以来,生物防治因其高防治效率以及低环境污染在果蔬病害防治上得到广泛研究及应用。本课题探究了生防细菌枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）菌株BS-1对猕猴桃软腐病病原菌的抑制效果、抑菌机理及有效抑菌成分的鉴定。此外评价了BS-1菌液及其发酵液对猕猴桃货架期的保鲜效果。为猕猴桃的采后软腐病的生物防治以及采后贮藏提供了新的思路,也为BS-1菌株的开发和应用推广提供理论依据。具体研究内容与结果如下:（1）平板对峙试验结果表明BS-1菌株在12种供试的猕猴桃软腐病病原菌平板上产生显著的抑菌圈,大小在4.01 mm～13.66 mm之间,其中主要致病菌葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）和拟茎点霉菌（Diaporthe nobilis）抑菌圈大小分别为5.04 mm和13.66 mm,表明BS-1菌株对猕猴桃软腐病的抑制效果具有一定的广谱性。（2）比较BS-1菌株挥发性成分和发酵液的体外抑菌效果,发现挥发性成分处理组中B.dothidea和D.nobilis菌丝长势与对照组一致,而发酵液处理组两种病原菌菌落直径显著小于对照组,生长得到明显抑制。进一步探究发酵液抑菌效果稳定性发现其在温度范围37℃～100℃、紫外照射时间范围0.5 h～2 h和酸性pH3～5、碱性pH 8～10范围内保持较好的抑菌效果。这表明该菌株所产生的主要抑菌活性物质可能存在于发酵上清液中并具有抑菌稳定性,而非挥发性成分。（3）果实体内抑菌试验发现发酵液可以减小B.dothidea和D.nobilis引起的病斑面积,表明发酵液可以抑制病原菌对果实致病能力,也进一步表明BS-1菌株的抑菌活性物质存在于发酵液中。（4）初步探究发酵液抑菌机理,结果表明发酵液可以抑制病原菌孢子萌发、破坏菌丝细胞膜导致菌丝死亡以及增强猕猴桃果实自身抗病性。发酵液可促进猕猴桃呼吸猝发氧化酶同系物（Respiratory burst oxidase homolog,RBOH）基因家族的表达,并激发更强更持久的活性氧（Reactive oxygen species,ROS）荧光、可提高超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、过氧化物酶（Peroxidase,POD）和多酚氧化酶（Polyphenol oxidase PPO）的活性以及可诱导抗病相关基因的上调。（5）对发酵液的抑菌有效成分进行鉴定,结果表明从发酵液中提取出来的粗蛋白和粗脂类在体外和体内均具有抑菌作用。对两种成分进行进一步分析表明抑菌蛋白成分的分子量范围在34 kDa～63 kDa之间,脂类抑菌成分很可能为伊枯草菌素。（6）将BS-1菌液和发酵液用于猕猴桃货架期保鲜发现两者均能延缓果实的软化、提高果实脆性、紧实度和其他品质,降低了果实的失重率和腐烂率。从而提高了猕猴桃的采后贮藏品质和延长果实货架期,尤其以发酵液的影响效果更为显著,为BS-1菌株之后在猕猴桃采后保鲜上的应用奠定了基础。
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