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目的:目前,肺癌已经成为威胁人类健康的第二大癌症,本实验通过构建整合外源基因SPC-neu-polyA的转基因小鼠,对其表型进行鉴定,旨在通过该转基因小鼠模型研究neu基因在发展中的作用以及肺炎与肺癌的关系。
方法:本实验分为两大部分,第一部分为显微注射得到整合SPC-neu-polyA的转基因小鼠,通过:PCR、Southern blot、Western blot、FISH、免疫组化对其进行鉴定,第二部分为转基因小鼠的表型鉴定,病理切片HE染色病理鉴定,Real-Time PCR鉴定炎症因子的表达、免疫组化鉴定炎症因子蛋白的表达。补充实验:免疫组化检测10例肺癌病人组织活检标本的neu蛋白表达和炎症因子的表达。
结果:通过PCR、Southern blot、FISH、检测SPC-neu-polyA完整的整合到转基因小鼠的16号染色体上。Western blot检测到了转基因小鼠中有neu蛋白的表达,IHC实验显示neu蛋白在转基因阳性小鼠的肺泡和支气管上皮表达。
病理切片HE染色发现转基因阳性鼠较正常小鼠有明显的炎症病变,并在年长小鼠中出现上皮细胞增生严重等癌前病变现象。免疫组化检测到10例肺癌病人肺组织活检标本均呈neu阳性或弱阳性,并伴有炎症因子表达。
结论:从以上实验结果,SPC-neu-polyA转基因小鼠已建系成功,表型鉴定为其为炎症到癌前病变的炎症疾病动物模型。该动物模型可用于研究neu在肺癌发展中的作用和研究肺炎与肺癌的关系。
目前,癌症是导致人类死亡的主要因素之一。尽管在癌症治疗方面取得了巨大进展,但是,其较高的复发率还是会导致死亡。连续治疗失败的一个可能因为是,残留的恶性细胞有类似干细胞的分化潜能,这样就能再次形成肿瘤和造成病灶转移。肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)假说认为,肿瘤组织中存在具有自我跟新能力,无限增殖和肿瘤形成能力的一小部分肿瘤细胞,近年来,随着在血液肿瘤和实体瘤中相继发现CSC存在的相关证据,对CSC的生物学特性的认识不断深入,对肿瘤的复发、病灶转移、耐药性形成也有了新的观点和研究方向,目前的研究主要集中在其分离鉴定阶段,本文就近年来该方面的研究进展作一综述。