小白菊内酯含硫肠道菌代谢产物的分离及体内外代谢产物鉴定

• 作 者: 周齐齐
• 出 处: 河北医科大学
• 发表日期: 2020年01期
• 关键词: 小白菊内酯 代谢产物 微生物转化 UPLC-MS 含硫代谢物

小白菊内酯是一种吉马烷型倍半萜烯内酯类的天然产物,也是多种菊科植物中的成分,1965年首次从传统草药小白菊（Tanacetum parthenium）中分离得到。近年来的研究证明,小白菊内酯具有抗炎、抗癌、抗疟疾、抗病毒、抗氧化、治疗偏头痛和保肝等作用。在一项有关药动学的研究中,大鼠经灌胃给予小白菊内酯后,结果显示小白菊内酯的生物利用度很低,约为7.78%。因此,本课题旨在阐明小白菊内酯在大鼠体内和经肠道菌代谢后的代谢产物及代谢机制,为小白菊内酯的成药性研究和新药开发提供依据和思路。目的:采用硅胶柱色谱和制备高效液相色谱技术,对小白菊内酯的微生物转化样品进行分离纯化,采用HR-MS和NMR技术对分离得到的代谢产物进行结构检测。采用UPLC-MS技术对小白菊内酯经大鼠及肠道菌转化的代谢产物类型进行鉴定,推测其代谢机制。方法:1.首先将小白菊内酯与大鼠肠道菌粗提物在厌氧培养液中一同孵育,然后用乙酸乙酯对孵育液进行提取,进而用硅胶柱色谱进行粗分,制备液相色谱纯化。对分离得到的单体化合物采用HR-MS和NMR波谱技术进行结构解析。2.大鼠灌胃给予小白菊内酯混悬液后,取其胆汁、尿液和粪便,以及体外肠道菌孵育液进行UPLC-MS测定。联合使用[M+Na]⁺,[M+H]⁺和[M+NH₄]⁺三种加和离子通过Metabolite Pilot软件分析鉴定小白菊内酯的代谢产物,并推测其代谢机制。结果:在小白菊内酯的大鼠肠道菌温孵液中,分离得到3个新的含硫化合物,经结构鉴定分别为:（11S）-13-sulfydryl-11,13-dihydroparthenolide（PA-H₂S）,13,13’-thiobis（（11S）-11,13-dihydroparthenolide）（PA₂-S）和13,13’-dithiobis（（11S）-11,13-dihydroparthenolide）（PA₂-S₂）。经UPLC-MS分析,共检测到33个代谢产物,包括18个含硫代谢产物。结论:本课题结合代谢产物提取分离方法和具有高灵敏度的UPLC-MS分析技术,阐明了小白菊内酯在大鼠体内和肠道菌培养液中的代谢机制;首次提出[M+Na]⁺,[M+H]⁺和[M+NH₄]⁺加和离子在代谢物鉴定中的联合分析;充分证明倍半萜烯内酯类化合物在肠道菌中的特征性转化途径。