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泛耐药的肺炎克雷伯菌、大肠杆菌对人类的健康造成严重的威胁,尤其是耐碳青霉烯类的肠杆菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE),几乎没有任何一种抗生素可以应对其感染。替加环素的出现,为以上的感染点亮了希望,但抗生素的不合理应用,加快耐药出现,会使唯一的治疗希望泯灭。本研究第一部分筛选了 224株非重复分离于浙江大学附属第一医院血样本中的肺炎克雷伯菌。筛选泛耐药替加环素敏感的菌株用来作为体内血流感染模拟的感染菌株,进行体内的替加环素抗感染治疗代谢动力学模拟,绘制时间杀伤曲线,确定最佳给药剂量,同时明确超剂量应用下,实验菌株对替加环素的药物动力学参数。在体内模拟实验后,筛选替加环素体内压力作用下耐药菌株。对压力诱导下的耐肺炎克雷伯菌菌株进行了外派泵抑制实验。实验结果显示替加环素抑制50%肺炎克雷伯菌生长的最低药物浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)50 为 lug/ml,MIC90 为 4ug/ml。根据美国临床实验室标准化协会(Clinical Laboratory Standards Institute,CLSI)标准和欧美药敏实验标准(European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing,EUCAST)和英国抗菌药物治疗协会(the British Society for Antimicrobial Chemotherapy,BS AC)标准,血样本来源肺炎克雷伯菌对替加环素的耐药率分别为4.3%和45.9%。超说明书剂量用药下0-1小时的杀伤率为0.4。在替加环素体内模拟压力作用可诱导替加环素不敏感肺炎克雷伯菌。压力诱导所得肺炎克雷伯菌在外派泵抑制作用下,对替加环素的MIC值减小。本研究的第二部分对筛选过程中耐替加环素的肺炎克雷伯菌以及两株同时携带MCR-1和NDM-1的大肠埃希菌EC1002以及EC1474,进行了 MIC、ST型以及S1-PFGE特点分析。进一步评估MCR-1的来源,携带质粒的特点,以及传播特性。肺炎克雷伯菌的多位点序列分析(Multilocus sequence typing,MLST)分型选用 pasteur 数据库(http://bigsdb.web.pasteur.fr/klebsiella/klebsiella.html),大肠埃希菌MLST分型选用UCC数据库(http://mlst.warwick.ac.uk/mlst/)。测序结果在数据库中在线比对,获得等位基因型和序列型(ST)。用XbaI限制性细菌内切酶对耐替加环素的22株肺炎克雷伯菌进行基因组原位消化,进行了 PFGE实验分析。实验结果发现,耐替加环素的肺炎克雷伯菌一共有16个不同的ST分型,占最高比例的为ST11,为所有ST分型的27.3%。在此研究中,我们发现了一个新型ST型,为ST1952。以3条带及3条带以上差异为一类型,分出17个基因型。MCR-1和NDM-1共同携带大肠埃希菌MIC显示:EC1002对碳青霉烯类,头孢菌素类,以及氨基糖苷类具有较高的抗性,但是对替加环素和喹诺酮类相对敏感;EC2474对替加环素外的所有抗生素耐药。PFGE对其克隆多样性的结果分析显示,两株细菌并无相关克隆。MLST分型提示EC1002为ST2373,EC2474为ST131。对两株细菌的S1-PFGE质粒质粒图谱分析显示:EC1002含有4个质粒,而EC2474含有3个质粒,其大小范围从80 KB 250 KB不等。Southern印记证实,MCR-1基因位于EC1002约80kb的质粒上,EC2474约250kb大小的质粒上。本研究对替加环素不敏感血流感染肺炎克雷伯菌以及NDM-1和MCR-1共同携带大肠埃希氏菌进行了流行病学调查和分析发现:替加环素不敏感血流感染肺炎克雷伯菌总共有16个ST型,呈分散分布。NDM-1和MCR-1同时携带大肠埃希菌耐药基因皆携带于质粒,本研究中的两株大肠埃希氏菌MCR-1和NDM-1位于不同的质粒,由于质粒可以在肠杆菌科之间高效的转移,MCR-1基因可能会跟NDM-1一样短期内在全世界范围内被传播发现。