【摘 要】
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背景:口腔鳞癌是口腔中发病率最高的癌症。正常的口腔黏膜上皮细胞在机体内环境改变或者受到理化因素刺激后,部分细胞出现过度增殖,黏膜出现癌变,进而发展成口腔鳞癌。核转录因子(nuclear factorκB,NF-κB)在肿瘤细胞拮抗凋亡的过程中发挥着重要的作用,增加了癌细胞的永生化能力。人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是一个
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背景:口腔鳞癌是口腔中发病率最高的癌症。正常的口腔黏膜上皮细胞在机体内环境改变或者受到理化因素刺激后,部分细胞出现过度增殖,黏膜出现癌变,进而发展成口腔鳞癌。核转录因子(nuclear factorκB,NF-κB)在肿瘤细胞拮抗凋亡的过程中发挥着重要的作用,增加了癌细胞的永生化能力。人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是一个内源性基因,它通过延长端粒增加细胞传代能力,且它与NF-κB互相促进,两者的相互作用增强了细胞的永生化能力。永生化鼻咽上皮细胞已被研究确认为鼻咽癌早期病变的一种细胞状态,人永生化口腔黏膜上皮细胞由正常细胞转化而来,兼具癌细胞的永生化能力,有理由相信它可能是正常细胞向癌细胞转变的一个中间介质,探索它的凋亡途径,有助于进一步认识正常细胞癌变的过程,为口腔鳞癌的预防和治疗提供新的思路。目的:通过将慢病毒介导的过表达hTERT人口腔黏膜上皮细胞(plv-HOMEC)与正常人口腔黏膜上皮细胞(HOMEC)和人口腔鳞癌细胞(Cal27)凋亡能力的对比,探究plv-HOMEC的凋亡机制,为进一步认识正常细胞向癌细胞的转化过程提供理论支持。方法:经兰州大学口腔医院伦理委员会批准,取得唇裂患儿一期手术术中切取的唇黏膜组织,酶消化法得到原代口腔黏膜上皮细胞。包装过表达hTERT的慢病毒颗粒,在获得原代HOMEC后将其转染慢病毒颗粒,得到plv-HOMEC株。Western Blot检测Cal27、plv-HOMEC和HOMEC的细胞质及细胞核内NF-κB表达量,并检测细胞内活性氧水平以验证内质网通路,检测细胞色素C表达量以验证线粒体通路,检测FasL基因表达量以验证死亡受体凋亡通路。结果:相比于HOMEC,plv-HOMEC中NF-κB的总表达量增加,主要体现在NF-κB的入核量增加,但两者的细胞质及细胞核内NF-κB表达量均远低于Cal27。plv-HOMEC的ROS水平与正常细胞无显著差异,两者均高于Cal27;plv-HOMEC的Cyt C表达量接近于Cal27,远低于HOMEC;plv-HOMEC的FasL基因表达量相比于正常细胞显著降低,略高于癌细胞。结论:plv-HOMEC的NF-κB入核量增加,抑制线粒体通路和死亡受体凋亡通路,使其获得稳定传代能力。提示在正常细胞癌变早期,可能先出现NF-κB入核量的增加,继而抑制线粒体通路和死亡受体凋亡通路,降低了细胞质内Cyt C的含量使得细胞获得更良好的内环境,FasL表达量减少使外界刺激对细胞的影响减弱,促进癌前状态的细胞进一步向癌细胞转化。
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