【摘 要】
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本实验利用农杆菌介导的方法,将携带双元诱导表达系统的载体pIndex3转入到野生型烟草当中,经过鉴定,初步建立了糖皮质激素诱导表达系统.在这个系统当中,转录因子GVG的基因由
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本实验利用农杆菌介导的方法,将携带双元诱导表达系统的载体pIndex3转入到野生型烟草当中,经过鉴定,初步建立了糖皮质激素诱导表达系统.在这个系统当中,转录因子GVG的基因由组成性启动子35S控制表达,绿色荧光蛋白基因mgfp5作为诱导表达的目的基因在诱导启动子的控制之下.诱导启动子由4个串联的GAL4上游激活序列(UAS)和一个微小35S启动子组成.绿色荧光蛋白的转录受到诱导剂的严格调控.未加诱导剂地塞米松(dexamethasone,Dex,人工合成糖皮质激素)时,检测不到绿色荧光蛋白的表达,加入诱导剂后首先在RNA水平检测到了mgfp5的转录,绿色荧光蛋白随着诱导剂地塞米松的扩散沿叶脉开始表达,当诱导剂去除后绿色荧光蛋白停止表达.诱导剂对基因表达的调控首先表现在新生叶上,老叶对诱导剂的敏感程度相对滞后一些.在质粒构建过程中mgfp5两端分别加上马铃薯X病毒(PVX)的非翻译区,结果表明非翻译区并未抑制绿色荧光蛋白的表达,为下一步试验奠定了基础.GVG系统对诱导剂具有非常高的专一性,并且对基因表达的控制非常严格,几乎没有基础表达,可以从时间空间及数量上对目的基因进行精确调控,这一系统的建立为今后利用化学诱导的方法进行理论和应用研究奠定了基础.
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