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第一部分缺氧诱导因子1α及巨噬细胞移动抑制因子在子宫内膜异位症组织中的表达目的:检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在子宫内膜异位症患者在位内膜组织、异位内膜组织及正常子宫内膜组织中的表达,分析在位内膜组织中HIF-1α及MIF的表达与不同的月经周期之间的关系,探讨HIF-1α及MIF在内异症患者异位内膜组织及在位内膜组织中的表达与子宫内膜异位症发病之间的关系。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HIF-1α及MIF mRNA在15例正常子宫内膜组织、15例子宫内膜异位症在位内膜组织及40例异位内膜组织中的表达:采用免疫组化方法及Western blot方法检测HIF-1α及MIF蛋白水平的表达。结果:(1)正常子宫内膜组织、子宫内膜异位症在位内膜组织及异位内膜组织中均表达HIF-1αmRNA及MIF mRNA。HIF-1α扩增片段长度为159bp,MIF扩增片段长度为127bp。以HIF-1αmRNA与内参β-actin mRNA的光密度比值表示HIF-1αmRNA水平,以MIF mRNA与内参β-actin mRNA的光密度比值表示MIF mRNA水平。结果正常子宫内膜组织、子宫内膜异位症在位内膜组织及异位内膜组织中HIF-1αmRNA分别为0.47±0.19、0.62±0.18、0.87±0.17,异位内膜组织中HIF-1αmRNA明显高于在位内膜组织及正常子宫内膜组织,而内异症在位内膜组织中的HIF-1αmRNA亦明显高于正常子宫内膜组织,Q检验两两比较发现各组之间的差异均具有统计学意义(P＜0.05);正常子宫内膜组织、子宫内膜异位症在位内膜组织及异位内膜组织中MIF mRNA分别为0.40±0.16、0.63±0.22、0.92±0.21,异位内膜组织中MIF mRNA明显高于在位内膜组织及正常子宫内膜组织,而内异症在位内膜组织中的MIF mRNA亦明显高于正常子宫内膜组织,Q检验两两比较发现各组之间的差异均具有统计学意义(P＜0.01)。在HIF-1αmRNA及MIF mRNA的表达与月经周期之间的关系方面:正常增殖期子宫内膜组织中HIF-1αmRNA略高于分泌期子宫内膜组织(0.48±0.24 vs0.44±0.13),但差异无统计学意义(P＞0.05);正常增殖期子宫内膜组织中MIFmRNA高于分泌期子宫内膜组织(0.47±0.16 vs 0.32±0.13)且差异有统计学意义(P＜0.05)。子宫内膜异位症增殖期在位内膜组织中HIF-1αmRNA略低于分泌期在位内膜组织(0.61±0.17 vs 0.63±0.20,P＞0.05);子宫内膜异位症增殖期在位内膜组织中MIF mRNA高于分泌期在位内膜组织(0.73±0.21 vs 0.51±0.19)且差异有统计学意义(P＜0.05)。(2)免疫组化结果显示HIF-1α的阳性染色呈棕黄色,主要定位于内膜组织中的腺上皮细胞,少量的散在于间质中的细胞也呈现阳性染色。MIF的阳性染色亦为棕黄色,也主要定位于腺上皮细胞,少量的散在于间质中的细胞也呈现阳性染色。Western-Blot进一步分析HIF-1α及MIF蛋白水平的表达,结果正常子宫内膜组织、子宫内膜异位症在位内膜组织及异位内膜组织中均表达这两种蛋白。分别以HIF-1α与β-actin的灰度比值及MIF与β-actin的灰度比值表示HIF-1α及MIF的蛋白表达水平。结果正常子宫内膜组织、子宫内膜异位症在位内膜组织及异位内膜组织中HIF-1α蛋白分别为0.35±0.13、0.45±0.12、0.81±0.21,异位内膜组织中HIF-1α蛋白明显高于异位症在位内膜组织,t检验差异有统计学意义(P＜0.05),内异症在位内膜组织中的HIF-1α蛋白明显高于正常子宫内膜组织,t’检验差异具有统计学意义(P＜0.05);正常子宫内膜组织、子宫内膜异位症在位内膜组织及异位内膜组织中MIF蛋白分别为0.46±0.11、0.66±0.12、0.98±0.32,异位内膜组织中MIF蛋白明显高于在位内膜组织,t检验差异具有统计学意义(P＜0.05),而异位症在位内膜组织中的MIF蛋白亦明显高于正常子宫内膜组织,t’检验差异具有统计学意义(P＜0.05)。在HIF-1α蛋白及MIF蛋白表达与月经周期之间的关系方面:正常增殖期子宫内膜组织中HIF-1α及MIF均略高于分泌期子宫内膜组织(0.36±0.14 vs0.33±0.13,HIF-1α;0.50±0.11 vs 0.41±0.09,MIF);子宫内膜异位症增殖期在位内膜组织中HIF-1α蛋白略低于分泌期在位内膜组织(0.43±0.09 vs 0.46±0.150,P＞0.05);异位症增殖期在位内膜组织中MIF蛋白略高于分泌期在位内膜组织(0.68±0.13 vs 0.63±0.12)但是差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论:初步研究结果提示HIF-1α及MIF在子宫内膜异位症患者中表达增高,可能与内异症发病有关;增殖期MIF的表达量略高于分泌期,提示在增殖期MIF可能对异位内膜促进生长作用更明显。第二部分缺氧诱导因子-1α及巨噬细胞移动抑制因子的表达与子宫内膜异位症患者不孕及临床分期的关系目的:探讨缺氧诱导因子-1α及巨噬细胞移动抑制因子在异位子宫内膜组织中的表达,分析伴有不孕者异位内膜组织中HIF-1α和MIF表达在不孕机制中的作用,探讨HIF-1α和MIF表达与子宫内膜异位症临床分期之关系。方法:应用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)方法检测HIF-1αmRNA和MIFmRNA在15例正常子宫内膜组织及40例异位内膜组织中的表达;采用Western-Blot方法检测HIF-1α和MIF蛋白水平的表达。按照临床分期及不孕分组比较HIF-1α和MIF的表达情况。其中40例子宫内膜异位症患者中有9例合并不孕。结果:一、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达与不孕的关系1、HIF-1αmRNA水平的表达与不孕的关系实时荧光定量PCR测得子宫内膜异位症患者异位内膜组织及正常子宫内膜组织中均表达HIF-1αmRNA。伴有不孕的异位症患者异位内膜组织中HIF-1αmRNA的相对定量为6.482±1.144;不伴有不孕的异位症患者异位内膜组织中HIF-1αmRNA的相对定量为3.006±1.129;正常子宫内膜组织中HIF-1αmRNA的相对定量为0.450±0.115。伴有不孕的EM患者异位内膜组织中HIF-1αmRNA水平明显高于不伴有不孕的EM患者异位内膜组织,t’检验比较两组差异有统计学意义(P＜0.01);不伴有不孕的EM患者异位内膜组织中HIF-1αmRNA水平明显高于正常子宫内膜组织,t’检验比较两组差异有统计学意义(P＜0.01)。2、HIF-1α蛋白水平的表达与不孕的关系Western blot分析子宫内膜异位症患者异位内膜组织及正常子宫内膜组织中均表达HIF-1α蛋白。伴有不孕的异位症患者异位内膜组织中HIF-1α蛋白的相对定量为1.034±0.182;不伴有不孕的异位症患者异位内膜组织中HIF-1α蛋白的相对定量为0.751±0.177;正常子宫内膜组织中HIF-1α蛋白的相对定量为0.348±0.116。伴有不孕的EM患者异位内膜组织中HIF-1α蛋白水平明显高于不伴有不孕的EM患者异位内膜组织,t检验比较两组差异有统计学意义(P＜0.01);不伴有不孕的EM患者异位内膜组织中HIF-1α蛋白水平明显高于正常子宫内膜组织,t检验比较两组差异有统计学意义(P＜0.01)。3、HIF-1α表达与子宫内膜异位症临床分期的关系本研究中以不同临床分期划分组别,测得Ⅰ/Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期EM患者异位内膜组织中HIF-1αmRNA的相对定量分别为3.758±2.022,3.770±2.000,3.842±1.562;HIF-1α蛋白的相对定量分别为0.955±0.190,0.812±0.209,0.729±0.203。各组之间HIF-1αmRNA的表达差别不明显,F检验各组间差异无统计学意义(P＞0.05);各组之间HIF-1α蛋白的表达差别也不明显,F检验各组间差异无统计学意义(P＞0.05)。二、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的表达与不孕的关系1、MIFmRNA水平的表达与不孕的关系实时荧光定量PCR测得子宫内膜异位症患者异位内膜组织及正常子宫内膜组织中均表达MIFmRNA。伴有不孕的异位症患者异位内膜组织中MIF mRNA的相对定量为8.261±2.757;不伴有不孕的异位症患者异位内膜组织中MIFmRNA的相对定量为3.399±0.754;正常子宫内膜组织中MIF mRNA的相对定量为0.134±0.070。伴有不孕的EM患者异位内膜组织中MIF mRNA水平明显高于不伴有不孕的EM患者异位内膜组织,t’检验比较两组差异有统计学意义(P＜0.01);不伴有不孕的EM患者异位内膜组织中MIF mRNA水平明显高于正常子宫内膜组织,t’检验比较两组差异有统计学意义(P＜0.01)。2、MIF蛋白水平的表达与不孕的关系Western blot分析子宫内膜异位症患者异位内膜组织及正常子宫内膜组织中均表达MIF蛋白。伴有不孕的异位症患者异位内膜组织中MIF蛋白的相对定量为1.397±0.315;不伴有不孕的异位症患者异位内膜组织中MIF蛋白的相对定量为0.861±0.197;正常子宫内膜组织中MIF蛋白的相对定量为0.448±0.154。伴有不孕的EM患者异位内膜组织中MIF蛋白水平明显高于不伴有不孕的EM患者异位内膜组织,t检验比较两组差异有统计学意义(P＜0.01);不伴有不孕的EM患者异位内膜组织中MIF蛋白水平明显高于正常子宫内膜组织,t检验比较两组差异有统计学意义(P＜0.01)。3、MIF的表达与子宫内膜异位症临床分期的关系本研究中以不同临床分期划分组别,测得Ⅰ/Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期异位症患者异位内膜组织中MIF mRNA的相对定量分别为4.671±2.396,4.569±2.648,4.228±2.446;MIF蛋白的相对定量分别为1.158±0.258,0.973±0.344,0.887±0.278。各组之间MIF mRNA的表达差别不明显,F检验各组间差异无统计学意义(P＞0.05);各组之间MIF蛋白的表达差别不明显,F检验各组间差异无统计学意义(P＞0.05)。结论:HIF-1α和MIF的高表达与子宫内膜异位症患者所致不孕有关。HIF-1α和MIF的表达与子宫内膜异位症临床分期无关。