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目的:我们的前期研究已经证实IL-10基因修饰人羊膜间充质干细胞(hAMSCsIL-10)比hAMSCs具有更好的调控创面炎症反应、促进创面血管形成及加速创面愈合的作用,本研究旨在探讨hAMSCsIL-10在体内外对创面纤维化形成相关因子表达的影响,进一步明确hAMSCsIL-10提高创面再生愈合质量的生物学效应,为将来可能的临床转化提供前期基础研究资料。方法:1、hAMSCsIL-10在体外对成纤维细胞纤维化相关因子表达的影响首先构建IL-10基因修饰的人羊膜间充质干细胞(hAMSCsIL-10)并检测其培养上清液中IL-10的含量;将hAMSCs、hAMSCs IL-10体外培养,分别获取条件培养基,将购买的人成纤维细胞株复苏后培养至第5代。分别研究hAMSCs、hAMSCsIL-10条件培养基对人真皮成纤维细胞迁移的影响;分别将hAMSCs、hAMSCsIL-10和人成纤维细胞在Transwell中共培养,然后用RT-PCR和Western blot法检测成纤维细胞中I型胶原、III型胶原、DCN、α-SMA、HAS2的基因和蛋白表达量。2、hAMSCsIL-10对小鼠皮肤创面愈合纤维化相关因子表达的影响用C57BL/6野生型小鼠建立全层皮肤缺损模型,分为三组:空白对照组、hAMSCs组、hAMSCsIL-10组,分别将PBS、hAMSCs、hAMSCsIL-10移植入创面后观察小鼠创面愈合情况及组织学变化,ELISA法检测小鼠创面组织中纤维化相关因子I型胶原、III型胶原、DCN、α-SMA、HAS2的含量。结果:1、hAMSCsIL-10在体外对成纤维细胞纤维化相关因子表达的影响成功构建hAMSCsIL-10后检测其上清液中IL-10的含量,结果提示hAMSCsIL-10高表达IL-10,而hAMSCs仅表达少量IL-10;划痕实验发现hAMSCs和hAMSCsIL-10条件培养基均可促进人成纤维细胞的迁移,且hAMSCsIL-10促进作用更明显;细胞共培养后发现hAMSCsIL-10可使成纤维细胞的I型胶原和α-SMA的表达下调,III型胶原、DCN、HAS2的表达上调,与hAMSCs相比调控作用更明显。2、hAMSCsIL-10对小鼠皮肤创面愈合纤维化相关因子表达的影响细胞移植后,hAMSCs组和hAMSCsIL-10组小鼠创面炎性细胞浸润均较对照组少,hAMSCsIL-10组与hAMSCs组相比炎性细胞浸润更少,创面愈合更快且愈合质量更高。建模后7天、14天,hAMSCsIL-10组与hAMSCs组相比,创面组织中I型胶原和α-SMA的表达量降低,III型胶原、DCN、HAS2的表达量增高;hAMSCsIL-10移植示踪可见14天仍有部分GFP阳性表达的细胞存在。结论:1、在体外hAMSCsIL-10与hAMSCs相比能够更有效的增强人真皮成纤维细胞迁移能力,上调成纤维细胞抗纤维化因子DCN、HAS2、III型胶原的表达,下调促纤维化因子α-SMA、I型胶原的表达。2、与hAMSCs相比,创面局部移植hAMSCsIL-10能更有效的上调小鼠皮肤创面抗纤维化因子DCN、III型胶原、HAS2的表达,下调促纤维化相关因子I型胶原、α-SMA的表达,并促进创面愈合,减轻瘢痕纤维化,改善创面愈合质量。