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目的:观察B7-H1在喉鳞状细胞癌(Laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)患者肿瘤组织中成纤维细胞(Cancer associated fibroblasts,CAFs)上的表达情况。探讨通过调控CAFs中B7-H1的表达,研究肿瘤微环境(Tumor microenvironment,TME)中B7-H1对肿瘤细胞增殖迁移及免疫逃避的影响。通过本研究为调控机体T细胞的免疫治疗应用于LSCC治疗提供了理论基础。为减少患者由于传统治疗所造成的头颈器官及其功能损害,提供新的思路。方法:收集20例确诊为喉鳞状细胞癌的患者标本,及其正常切缘喉标本,进行冰冻切片,免疫荧光染色,镜下观察B7-H1表达。通过标本消化分离培养喉鳞状细胞癌肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)及正常成纤维细胞(Normal fibroblasts,NFs),并进行纯化及荧光鉴定。通过流式检测纯化的CAFs及NFs中B7-H1的表达。根据结果以si RNA转染下调CAFs的B7-H1表达,并通过RT-PCR检测B7-H1在m RNA水平的表达。通过增殖实验及划痕实验比较CAFs与B7H1-si RNA转染组CAFs区别及改变。通过共培养实验比较不同B7-H1表达情况下的CAFs与HEP-2细胞共同培养的差别,同样比较不同B7-H1表达情况的CAFs与T细胞共培养情况。并通过多种细胞因子检测来验证。结果:(1)喉鳞状细胞癌的患者标本中有15例有B7-H1表达,而正常组未见有B7-H1表达。CAFs经过3代培养,NFs经过2代培养后纯化,CAFs及NFs均为波形蛋白(Vimentin)阳性,而CAFs还为α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA,CAFs特异性蛋白)阳性。(2)流式结果显示:CAFs细胞膜表面B7-H1表达较NFs显著增高,有统计学差异(P<0.05)。(3)RT-PCR结果显示:B7H1-si RNA转染组中B7-H1明显低于control-si RNA组。(4)细胞增殖实验结果显示:B7H1-si RNA转染组增殖能力明显低于未处理组(P<0.05);划痕实验显示:B7H1-si RNA转染组迁移能力低于未处理组(P<0.05)。(5)Hep-2细胞共培养实验结果显示B7H1-si RNA转染组中肿瘤细胞增殖明显低于未处理组(P<0.05)。T细胞共培养实验及ELISA检测结果显示:B7H1-si RNA转染组中T细胞的增殖明显高于未处理组,有统计学差异(P<0.05);与未处理组相比,B7H1-si RNA转染组中IL-2分泌增加且IL-10分泌减少。结论:LSCC患者CAFs上B7-H1表达要高于NFs,降低CAFs上B7-H1的表达可以显著降低CAFs的增殖及迁移能力。并降低Hep-2细胞的增殖,加强T细胞的增殖及活化,增强T细胞的免疫作用。