【摘 要】
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将分别含编码猪IL-2蛋白和猪IL-6蛋白基因的重组质粒即pETPIL-2、pETPIL-6的BL21(DE)LysS工程菌,在IPTG的诱导下,以包涵体的形式成功地表达了猪IL-2、IL-6蛋白,经SDS-PAGE分
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将分别含编码猪IL-2蛋白和猪IL-6蛋白基因的重组质粒即pETPIL-2、pETPIL-6的BL21(DE<,3>)LysS工程菌,在IPTG的诱导下,以包涵体的形式成功地表达了猪IL-2、IL-6蛋白,经SDS-PAGE分析,在分子量分别为18.6Kd和25.0Kd处有一特异表达的蛋白带与预计的猪IL-2蛋白和IL-6蛋白的大小一致;并且分别占菌体蛋白的22.3~28.7﹪和30.6~38.35﹪.对重组菌大量诱导表达后,收集菌体,冻融,超声波裂解,离心收集包涵体,再分别用2mmol/L EDTA, 1mol/l NaCl,1﹪TritonX-100,0.5﹪ TritonX-100,1mol/l尿素,3mol/l尿素等去污剂和低浓度变性剂洗涤包涵体后,以8mol/l尿素变性溶解包涵体,经固化金属亲和层析法纯化后,纯度均达到95.0﹪以上;纯化的包涵体用GSH/GSSH氧化还原法复性,复性回收率分别为40.66﹪和39.00﹪.用MTT法检测IL-2、IL-6生物活性,应用SPSS8.0统计软件进行方差分析,结果表明,复性的重组猪IL-2和重组猪IL-6具有极显著的体外增殖活化淋巴细胞的能力.
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