【摘 要】
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研究背景与目的:胆囊癌是最常见的胆道系统恶性肿瘤,其发病率在消化系统恶性肿瘤中位居第五,恶性程度高,侵袭力强,进展快。手术切除、放疗、化疗等现有治疗手段的效果不甚理
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研究背景与目的:胆囊癌是最常见的胆道系统恶性肿瘤,其发病率在消化系统恶性肿瘤中位居第五,恶性程度高,侵袭力强,进展快。手术切除、放疗、化疗等现有治疗手段的效果不甚理想。因此,寻找新的治疗手段对提高胆囊癌的治疗水平,改善其预后具有重要意义。近年来,植物来源的药物得到越来越多的重视,通过从植物中提取独特的化学成分,大大提高了新药的发现率。和厚朴酚是落叶乔木厚朴的根茎皮提取物,传统认为其具有抗炎、缓解焦虑和消化不良的功用,而其抗癌作用在一些肿瘤的研究中也得到证实。本论文旨在明确和厚朴酚对胆囊癌的作用,并研究其可能的作用机制,评价和厚朴酚安全性。方法:首先,用不同浓度的和厚朴酚分别处理胆囊癌细胞株SGC-996、GBC-SD、NOZ、OCUG-1,作用特定时间后,使用细胞毒性试验(CCK-8法)检测细胞生长情况,使用平板克隆形成试验、流式细胞术分别检测细胞株SGC-996和GBC-SD的克隆形成能力、细胞生长周期及细胞凋亡情况的变化。然后,使用胆囊癌细胞株SGC-996和GBC-SD建立裸鼠人胆囊癌移植瘤模型,成瘤至一定体积后,分组定期腹腔注射特定浓度和厚朴酚或安慰剂,观察裸鼠,并定期测量处理组和对照组肿瘤体积变化和裸鼠体重。裸鼠处死后,剥离肿瘤并称重,主要脏器经包埋切片后HE染色并在镜下观察。最后,在和厚朴酚作用后,用Western blotting检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:CCK-8实验结果显示和厚朴酚可以明显抑制胆囊癌细胞的生长活性,并呈现浓度和时间依赖性。通过平板克隆形成实验,发现和厚朴酚可以抑制单个胆囊癌细胞克隆形成能力。流式细胞仪检测细胞周期结果提示,与对照组比较,和厚朴酚能够使胆囊癌细胞阻滞在G0/G1期(P<0.05)。流式细胞仪检测不同药物浓度组胆囊癌细胞凋亡情况,结果显示药物处理组的细胞凋亡率显著高于对照组P<0.05),且药物浓度越高,凋亡比率越高。在给药4周后,和厚朴酚处理组裸鼠移植瘤的体积明显小于对照组(P<0.01);SGC-996成瘤处理组和GBC-SD成瘤处理组的瘤重抑制率分别为65.89%和56.22%;处理组和对照组裸鼠的体重无明显组间差异(P>0.05);裸鼠无明显中毒症状,其主要脏器的病理切片分析未发现明显组织损伤。不同浓度的和厚朴酚(0、20、40、60μmol/L)处理SGC-996和GBC-SD细胞48h后,随药物浓度的升高,G0/G1期相关蛋白Cyclin D1、Cdk4及Cdk6的表达量逐渐减少。Bcl-2/Bax比值降低,呈现一定的浓度依赖趋势。Cleaved-caspase 9、Cleaved-caspase 3、Cleaved-PARP蛋白表达量则随加药浓度的增加而递增,未发现各组间Caspase 8蛋白表达量存在明显差异。裸鼠肿瘤组织中对照组和给药组的凋亡相关蛋白的表达量变化与体外实验一致。结论:和厚朴酚具有体外和体内杀伤胆囊癌的作用。一方面它可以通过调节细胞周期蛋白的表达阻滞细胞周期进程以抑制癌细胞的增殖,另一方面,它通过内始式(线粒体)途径诱导细胞凋亡。和厚朴酚在胆囊癌的治疗中具有应用前景。
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