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姬松茸是一种珍贵的药食兼用真菌,近年来研究发现,姬松茸具有的多种生物活性与其所含多糖密切相关。本实验通过正交设计与均匀设计研究了三种酶的最佳固定化条件,及游离酶和固定化酶提取姬松茸多糖时对多糖得率的影响,得到如下结论:采用均匀设计法分别考察了不同酶解时间、pH值、温度、加酶量、固液比对纤维素酶、果胶酶以及木瓜蛋白酶酶解反应的影响。并研究了三种酶联合使用时不同次序以及超声波协同提取时的最佳条件。结果表明,超声波协同复合酶法可显著提高姬松茸多糖的提取率,其最佳提取条件为:超声波作用20 min,分步加酶法(先加果胶酶:pH值3.8、温度50℃、时间90 min、加酶量7000 U/g、固液比1:45;然后加纤维素酶:pH值3.6、温度75℃、时间120 min、加酶量150 U/g、固液比1:45;最后加木瓜蛋白酶:pH值3.6、温度75℃、时间120 min、加酶量20000 U/g、固液比1:45),多糖提取率可达14.51%。采用交联法制备的固定化复合酶提取姬松茸多糖具有最高的多糖得率,它的最佳固定化条件和多糖提取工艺如下:复合酶最佳固定化条件为:在50℃和pH5的条件下,用1.0%的明胶溶液协同3.5%的海藻酸钠溶液来固定纤维素酶:木瓜蛋白酶:果胶酶为1:1:1.4的复合酶液,在此条件下固定化复合酶中果胶酶、纤维素酶、木瓜蛋白酶的平均酶活力回收率分别为52.74%、57.98%、56.93%。复合酶最佳提取条件为:固液比1:35;加酶量姬松茸:固定化酶为10:1.28(其中纤维素酶15 U/g,果胶酶293 U/g,木瓜蛋白酶5000U/g);酶解时间2.0h;热水浸提时间2.5h。提取多糖的平均得率为18.65%。