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目的:利用细胞实验、动物实验探究渐尖毛蕨二氢黄酮苷对糖尿病肾病作用及其机制,为以后将进一步进行相关制剂开发提供药理依据。方法:一、体外细胞实验:1.渐尖毛蕨二氢黄酮苷（Cyslosorus acuminatus flavonone glycoside,CAF）对高糖刺激的人肾小管上皮细胞（Human renal tubular epithelial cells,HK-2）增殖影响,细胞随机分组为正常组、等渗对照组、高糖模型组和给药组,其中给药组又分为一个阳性对照给药组,六种不同浓度给药组(浓度分别为2.5μg·mL-1、5μg·mL-1、10μg·mL-1、25μg·mL-1、50μg·mL-1和100μg·mL-1),在细胞培养24 h,48 h和72 h后,采用CCK8试剂盒方法检测各分组细胞存活率。2.CAF对高糖刺激的HK-2细胞的氧化损伤影响,细胞随机分组为正常组、等渗对照组、高糖模型组及两种不同浓度的给药组(终浓度分别为25和50μg·mL-1),在细胞培养48 h和72 h后,用流式细胞仪检测细胞里活性氧簇（Reactive Oxygen Species,ROS）水平。3.CAF对高糖刺激的HK-2细胞的上皮-间质转化（epithelial-mesenc-hymal transition,EMT）影响,细胞随机分组为正常组、高糖模型组、给药(50μg·mL-1)+高糖组,再利用免疫荧光法检测EMT相关蛋白。二、整体动物实验:选取50只SPF级雄性Wistar大鼠,随机分为5组:正常对照组、DKD模型组、罗格列酮阳性对照组和CAF剂量为12.5和25 mg/kg给药组。在大鼠适应环境一周后,实验开始除正常组大鼠外,其他组大鼠给予高脂饮食。到第四周末,除正常组外,其他组大鼠腹腔注射60 mg/kg的链脲霉素（Streptozotocin,STZ）,继续给予高脂饮食。在注射72 h后检测大鼠空腹血糖浓度,选血糖浓度大于16.7 mmol·L-1的大鼠进入实验。从第13周开始到16周实验结束,给药组按规定剂量给大鼠灌胃,正常组和DKD模型组大鼠灌胃同体积的生理盐水注射液。给药结束后,收集血样,取肾组织固定、送检。实验检测指标如下:1.生化指标检测:采用生化方法检测大鼠空腹血糖、血肌酐和尿素氮含量2.组织学分析:采用Masson染色、天狼星红染色和过碘酸雪夫染色（Periodic Acid-Schiff stain,PAS）观察肾组织的病理改变3.分子生物学检测:采用免疫组化法检测EMT指针蛋白,采用We-stern blot方法检测肾组织中β-catenin、糖原合成酶激酶-3β（Glycogen S-ynthase Kinase 3β,GSK-3β）和磷酸化的糖原合成酶激酶-3β（Phosphor-ylated glycogen synthase kinase 3β,p-GSK-3β）表达。结果:一、体外细胞实验1.高糖刺激24 h后,等渗对照组和正常组之间细胞存活率没有显著性差异（P>0.05）,各组HK-2细胞的细胞存活率间均没有显著性差异（P>0.05）。高糖刺激48 h后,同正常组细胞存活率相比,等渗对照组的没有显著性变化（P>0.05）,高糖模型组的显著性上升（P<0.01）;同高糖模型组相比,CAF浓度为2.5和5μg·mL-1的两组能够抑制高糖诱导的细胞增殖（P<0.05）,CAF浓度为10μg·mL-1、25μg·mL-1、50μg·mL-1和100μg·mL-1的四组能明显抑制高糖诱导的细胞增殖（P<0.01）。高糖刺激刺激72 h后,同正常组细胞存活率相比,等渗对照组的没有显著性变化（P>0.05）,高糖模型组的显著性上升（P<0.01）;六种不同浓度的CAF能够明显抑制高糖诱导的细胞增殖（P<0.01）。2.无论是48 h或72 h后,同正常组HK-2细胞内ROS相比,高糖组的ROS水平显著升高（P<0.01）;高糖组相比,CAF浓度为25μg·mL-1和50μg·mL-1的两组能显著抑制ROS的聚集。3.免疫荧光检测结果显示,同高糖组相比,浓度为50μg·mL-1的CAF能抑制波形蛋白（vimentin）和纤维连接蛋白（fibronectin,FN）表达。二、整体动物实验1.同正常对照组相比,DKD模型组的大鼠空腹血糖、血肌酐（serum creatinine,scr）和尿氮素（Blood urea nitrogen,BUN）含量明显升高（P<0.01）;同DKD模型组相比,CAF剂量为12.5和25 mg/kg这两组明显抑制了大鼠空腹血糖（P<0.01）、血肌酐（P<0.05）和尿素氮（P<0.01）上升趋势。2.同正常对照组相比,Masson染色和天狼星红染色显示DKD模型组大鼠有明显的肾脏胶原沉积,过碘酸雪夫染色（PAS）显示DKD模型组大鼠肾小球基底膜明显增厚;同DKD模型组,CAF剂量为12.5和25 mg/kg这两组能明显改善DKD大鼠的肾脏胶原沉积与肾小球基底膜增厚。3.同正常对照组相比,DKD模型组大鼠肾脏中的α-平滑肌肌动蛋白（alpha Smooth Muscle Actin,α-SMA）和纤维连接蛋白（fibronectin）是过度表达状态,而上皮细胞钙粘蛋白（E-cadherin）的表达存在一定的缺失;同DKD模型组相比,CAF剂量为12.5和25 mg/kg这两组能抑制α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和纤维连接蛋白（fibronectin）过度表达,一定程度上减轻肾脏中上皮细胞钙粘蛋白（E-cadherin）的缺失。同正常对照组相比,DKD模型组大鼠肾脏中的β-链蛋白（β-catenin）表达水平和GSK-3β磷酸化程度都大幅上升（P<0.01）;同DKD模型组相比,CAF剂量为12.5 mg/kg能抑制DKD大鼠肾脏中的β-catenin表达水平和降低GSK-3β磷酸化的程度（P<0.05）,CAF剂量为25 mg/kg能明显抑制DKD大鼠肾脏中的β-catenin表达水平和降低GSK-3β磷酸化的程度（P<0.01）结论:1.CAF能明显抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞增殖和氧化损伤,能改善DKD大鼠的肾脏胶原沉积和基底膜增厚,且具有抑制肾脏EMT和纤维化的作用。2.CAF可能通过降低β-catenin表达和抑制GSK-3β磷酸化失活,来调控Wnt/β-catenin信号通路,最终减轻DKD大鼠肾组织的纤维化。