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[目的]:
探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)或/和曲安奈德(triamcinolone acetonide, TA)在蛋白质水平对人视网膜色素上皮细胞合成和分泌色素上皮细胞衍生因子(pigment epithelium-derived factor, PEDF)的影响及其可能的信号传导通路。
[方法]:
体外培养人视网膜色素上皮细胞(cultured human retinal pigment epithelial cells-19, ARPE-19);培养液中加入TA,浓度分别为40μg·L-1、400μg·L-1、4000μg·L-1、4×104μg·L-1、4×105μg·L-1及4×106μg·L-1,干预12小时、24小时、48小时、72小时后MTT法检测细胞增殖情况；TA以40μg·L-1、400μg·L-1、4000μg·L-1及4×104μg·L-1的浓度分别干预ARPE-19细胞,作用12小时、24小时、48小时,用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测培养液及胞浆中PEDF的表达量；以TNF-α(20ng·ml-1)、TA(400μg·L-1)分别和同时干预ARPE-19细胞,作用1小时、6小时、24小时,用蛋白免疫印迹法检测培养液及胞浆中PEDF的表达量,以及胞浆中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(phospho-p38 mitogen activated protein kinase, p-p38MAPK)的表达量。
[结论]:低浓度TA不影响RPE细胞的增殖,而当浓度达到或高于4×105μg·L-1时,TA能够抑制RPE细胞的增殖；TNF-α能够抑制RPE细胞合成和分泌PEDF蛋白,并且上调磷酸化p38MAPK蛋白的表达；TA能够促进RPE细胞合成和分泌PEDF蛋白,并且下调磷酸化p38MAPK蛋白的表达；TA能够减弱TNF-α抑制RPE细胞合成和分泌PEDF蛋白以及上调磷酸化p38MAPK蛋白表达的作用。TNF-α及曲安奈德可能通过p38MAPK信号传导通路影响RPE细胞合成和分泌PEDF,但其中复杂的基因调控机制仍需进一步研究阐明。