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目的:维生素B12又称氰钴胺素。主要存在于动物性食品中，深红色针状晶体，结构性质稳定。它是维持正常造血功能、促进机体生长、保持神经系统功能的必需维生素，对人体健康具有重要作用。维生素B12在食品中的含量很低。婴儿配方乳粉根据其类母乳化食品的要求，需要添加符合国家要求含量的维生素B12。本文论述了近年来维生素B12检测方法的研究现状，分析了各种检测方法的特点，并根据实际检验需要和婴儿配方乳粉的特点对维生素B12检测方法进行了研究。研究出了高效液相色谱紫外检测与荧光检测两种不同的方法。
方法:婴儿配方乳粉的基质复杂，本文针对其特点对样品的前处理方法进行了大量的实验研究，探索出了以弱酸缓冲液除杂蛋白，固相萃取柱净化提取液，高纯氮气吹扫浓缩维生素B12为主要特点的实验方法，为高效液相色谱的检测提供了条件。而在荧光检测中，为使维生素B12具有荧光性，需要在前处理中对其进行衍生转化，主要采用强碱热处理，裂解分子结构，产生具有荧光性的α—核唑磷酸。本文对色谱条件进行了摸索，提出了一套新的而又切实可用的色谱检测方法。在高效液相紫外检测方法研究中:采用BDS HYPERSIL C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），以水-乙腈为流动相;流速0.25ml/min，检测波长361nm，柱温40℃。洗脱梯度:0-10min，乙腈在流动相中的比例为10％;10-35min，乙腈的比例线性升到30％。在高效液相荧光检测的方法研究中:采用C18 MG色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-磷酸缓冲盐为流动相;流速1ml/min，检测波长250/312nm，柱温25℃。洗脱梯度:0-5min，乙腈在流动相中的比例为10％;5-30min，乙腈的比例线性升到15％。
结果:紫外检测方法:维生素B12的检出限为20ng/ml，线性范围在0.0505～3.232μg/ml，重复性实验的RSD％为2.5289％，回收率在92.23％-96.68％，相对标准偏差(RSD)为2.04％。荧光检测方法:维生素B12的检出限为50ng/ml，线性范围在0.075525～4.8336μ g/ml，重复性实验的RSD％为8.626％，回收率在86.37％-92.68％，相对标准偏差(RSD)为2.68％。本文探索并优化了实验条件，将维生素B12在不同固相萃取柱与色谱柱上的保留特性进行了比较研究，定性定量分析了乳粉中的维生素B12。在对数种婴儿配方乳粉的检验中取得了满意的效果。这两种检测方法高效、快捷，满足了婴儿配方乳粉中维生素B12检测的实际需要，达到了实验目的。同时，在大量实践中，本文对色谱检测技术有了深的认识，提出了不同以往的看法，认为低流速能够解决某些物质出峰过低，峰型不好的问题。另外实验中也发现了许多问题，包括维生素B12存在形式的细分研究、其他化学物质的影响作用，样品前处理的改进，亲和免疫吸附柱的使用等等，都有待进一步的研究。