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目的:观察妊娠不同时期胚胎小鼠肾脏nNOS的表达,探讨nNOS在胚胎小鼠肾脏早期发育中的意义。
方法:选用成年健康昆明小白鼠,按雌雄比例3:1同窝饲养,采用检查阴道栓脱落的方法确定雌鼠受孕时间。选取胚龄12天(ED12)、14天(ED14)、16天(ED16)、18天(ED18)的胎鼠及出生时(PDO)仔鼠,分5组,每组各6只母鼠,每只母鼠取2只胎鼠或仔鼠,剖腹取肾脏,常规制作石蜡切片,用SP法对各组切片进行免疫组织化学(IHC)染色及图象分析;用免疫印迹技术(Westernblot)及光密度分析系统分别对各组胎鼠或仔鼠肾脏内nNOS进行定量检测。
结果:(1)ED14组肾脏nNOS在生肾区输尿管芽部位呈阳性表达,其他部位均无阳性表达;ED16组生肾区输尿管芽nNOS表达减弱,肾近端小管呈阳性表达,同时远端小管亦有弱阳性表达;ED18组nNOS阳性表达主要出现在肾近端小管、远端小管及致密斑,髓放线和髓质中的近直小管nNOS表达阳性,而集合管上皮未见nNOS表达,除成熟肾小体肾小囊局部偶见阳性细胞外,各级肾小体nNOS表达均呈阴性;PDO组肾脏nNOS表达部位基本与ED18组相同,致密斑中nNOS呈强阳性表达,髓放线和髓质中远直小管表达亦呈阳性。(2)Westernblot及光密度分析显示:ED14组肾脏nNOS含量最少,随后逐渐增多,PDO组肾脏nNOS含量最多。
结论:(1)胚胎小鼠肾脏nNOS在胚胎第14天开始呈阳性表达,以后含量逐渐升高,出生时含量最高。(2)nNOS表达的部位从生肾区输尿管芽逐渐扩展至肾近端小管、远端小管及致密斑,这一结果表明nNOS在胚胎小鼠肾脏发育的早期阶段起重要作用。